m6A修饰的MEF2A通过PD-L1/SOX12轴削弱结直肠癌对西妥昔单抗敏感性的机制研究

本研究针对结直肠癌(CRC)西妥昔单抗耐药难题，揭示了转录因子MEF2A通过m6A甲基化修饰上调后激活PD-L1/SOX12信号轴的关键作用。苏州大学团队发现RBM15/IGF2BP1介导的MEF2A m6A修饰可转录激活PD-L1并稳定SOX12 mRNA，从而降低CRC对西妥昔单抗的敏感性。该研究为克服靶向治疗耐药提供了新靶点，发表于《Cell Death Discovery》。

　　

在肿瘤治疗领域，结直肠癌(CRC)的靶向治疗耐药始终是临床面临的重大挑战。作为抗EGFR治疗的经典药物，西妥昔单抗虽然能显著改善转移性CRC患者的预后，但获得性耐药导致约50%患者最终治疗失败。这种耐药性的分子机制错综复杂，涉及表观遗传调控、免疫逃逸和干细胞特性等多重因素，但其中关键驱动因素尚未完全阐明。

苏州大学的研究团队将目光聚焦于转录因子MEF2A——这个在心肌发育和肿瘤转移中具有多重功能的蛋白。前期研究发现MEF2A在CRC组织中异常高表达，且与患者不良预后相关，但其在靶向治疗耐药中的作用仍是未解之谜。更引人注目的是，生物信息学预测显示MEF2A mRNA存在N6-甲基腺苷(m6A)修饰位点，这种最常见的RNA表观修饰如何影响其功能？这些科学问题促使研究人员开展了这项机制研究。

研究团队运用了多组学技术联合作战：通过临床样本队列(20例CRC组织，含8例敏感和12例耐药样本)进行分子表达谱分析；采用CRISPR-Cas9构建PD-L1基因敲除细胞模型；结合RNA免疫共沉淀(RIP)、染色质免疫沉淀(CHIP)、甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP)等表观遗传学研究手段；建立裸鼠移植瘤模型验证体内疗效。

MEF2A在CRC耐药中的临床意义
临床样本分析揭示：与癌旁组织相比，CRC组织中MEF2A mRNA和蛋白水平显著升高，且在耐药组升高更明显。Kaplan-Meier生存分析显示高表达MEF2A患者3/5年生存率更低。体外实验证实，敲低MEF2A能增强西妥昔单抗对CRC细胞的生长抑制和促凋亡作用，伴随凋亡标志物cleaved caspase-3上调和细胞周期蛋白(cyclin D1/E1, CDK2)下调。

MEF2A-PD-L1转录调控轴的发现
通过JASPAR数据库预测和系列实验验证，首次阐明MEF2A直接结合PD-L1启动子区域(-1487~-1478bp)：荧光素酶报告基因实验显示MEF2A过表达使野生型PD-L1启动子活性提升2.5倍；CHIP证实MEF2A抗体可富集PD-L1启动子序列；EMSA证明两者存在直接相互作用。功能拯救实验表明，PD-L1过表达可逆转MEF2A敲低带来的西妥昔单抗增敏效应。

PD-L1-SOX12 mRNA稳定机制
创新性发现PD-L1具有RNA结合蛋白特性：RNA pull-down显示PD-L1能捕获SOX12 mRNA；免疫荧光-FISH共定位证实两者在胞质共存；RIP实验显示PD-L1抗体可富集SOX12 mRNA。放线菌素D处理实验证明PD-L1能延长SOX12 mRNA半衰期。在机制上，SOX12过表达可抵消PD-L1敲低带来的治疗增敏作用，提示SOX12是下游效应分子。

m6A修饰调控MEF2A表达的分子机制
发现CRC耐药组织中MEF2A mRNA的m6A修饰水平显著升高。ENCORI数据库预测并实验验证：m6A"书写器"RBM15和"阅读器"IGF2BP1共同识别MEF2A mRNA——RNA pull-down显示两者均可被MEF2A探针捕获；RIP证实RBM15/IGF2BP1抗体能富集MEF2A mRNA。关键的是，RBM15通过增强IGF2BP1对MEF2A mRNA的结合来维持其稳定性。

体内实验验证
裸鼠移植瘤实验显示，MEF2A敲低联合西妥昔单抗治疗组肿瘤体积最小(减少约60%)，TUNEL染色显示凋亡细胞增加3倍，免疫组化显示增殖标志物Ki-67表达最低。Western blot证实该组PD-L1和SOX12蛋白水平显著下调。

这项研究首次绘制出"RBM15/IGF2BP1-m6A-MEF2A-PD-L1-SOX12"的完整信号轴，为理解CRC靶向治疗耐药提供了新视角。特别值得注意的是：发现PD-L1具有非免疫检查点功能——通过稳定SOX12 mRNA直接参与耐药调控；揭示m6A修饰通过双重调控(MEF2A转录活性和mRNA稳定性)影响治疗敏感性。这些发现不仅为预测西妥昔单抗疗效提供了潜在生物标志物，更提示靶向MEF2A m6A修饰可能成为克服耐药的新策略。未来研究可进一步探索该通路与肿瘤微环境免疫特征的交互作用，以及开发特异性MEF2A抑制剂的可能性。