丹参酸A通过促进HEV介导的干细胞样CD8+T细胞浸润增强三阴性乳腺癌抗PD-1治疗的机制研究

本研究针对三阴性乳腺癌(TNBC)免疫治疗响应率低的难题，揭示了传统中药成分丹参酸A(SAA)通过促进高内皮微静脉(HEV)形成和干细胞样CD8+T细胞(TCF1+/SLAMF6+)浸润，显著增强抗PD-1疗法疗效的机制。团队通过4T1/B16小鼠模型和体外实验证实，SAA能维持内皮细胞高表达ACKR1/CDH5等标志物，重塑肿瘤免疫微环境，为TNBC联合免疫治疗提供新策略。

　　

三阴性乳腺癌(TNBC)作为乳腺癌中最具侵袭性的亚型，因其缺乏雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(HER2)表达，对传统治疗响应有限。尽管免疫检查点抑制剂(ICIs)如抗PD-1疗法带来希望，但肿瘤微环境(TME)中免疫细胞浸润不足和免疫抑制性微环境导致疗效欠佳。高内皮微静脉(HEVs)作为淋巴细胞浸润的关键通道，其数量与免疫治疗响应正相关，但如何通过药物调控HEVs形成仍是未解难题。

湖北省肿瘤医院放疗中心乳腺癌中心团队在《Cancer Immunology, Immunotherapy》发表的研究，创新性地从传统中药丹参活性成分入手，发现丹参酸A(Salvianic acid A, SAA)可显著增强抗PD-1治疗TNBC的效果。研究人员通过4T1三阴性乳腺癌和B16黑色素瘤小鼠模型，结合流式细胞术、免疫荧光和多组学分析，系统阐明了SAA通过维持内皮细胞高表达ACKR1/MECA-79等标志物，促进HEVs形成和干细胞样CD8⁺T细胞(TCF1⁺/SLAMF6⁺)浸润的分子机制。

关键技术方法包括：建立4T1/B16小鼠移植瘤模型进行联合给药实验；流式细胞术分析肿瘤浸润淋巴细胞亚群；免疫组化/免疫荧光检测HEVs标志物CD31/MECA-79；RT-PCR/Western blot检测内皮细胞表型相关基因；体外共培养实验验证SAA对肿瘤细胞、CD8⁺T细胞和内皮细胞的直接作用。

SAA增加抗PD-1治疗疗效
联合治疗组肿瘤体积较单药组缩小80%（P<0.001），生存期显著延长。值得注意的是，SAA本身不直接杀伤肿瘤细胞，体外实验显示即使80μmol/L浓度对4T1/MDA-MB-231细胞活力也无影响。

重塑免疫微环境
流式数据显示SAA+aPD-1组CD8⁺T细胞浸润增加3倍（P<0.001），且IFN-γ⁺和Ki-67⁺功能性亚群显著扩增。同时M2型巨噬细胞减少40%（P<0.01），但调节性T细胞(Tregs)比例未受影响，表明SAA选择性优化免疫微环境。

促进干细胞样CD8⁺T细胞浸润
多重免疫荧光显示，联合组TCF1⁺CD8⁺T细胞密度增加5倍（P<0.01）。流式证实SLAMF6⁺PD-1^-TIM3^-干细胞样亚群在肿瘤组织特异性富集，而外周血中无此变化，提示SAA局部调控特性。

诱导HEVs形成

MECA-79⁺HEVs密度增加3倍（P<0.001），且TA-HECs（肿瘤相关高内皮细胞）中ACKR1表达提升2.5倍。体外实验证实SAA能维持内皮细胞高表达CD34/St3gal6等HEV特征基因，延缓培养中的表型丢失。

分子机制解析
SAA特异性上调内皮细胞ACKR1（P<0.01）和CDH5（P<0.05）表达，Western blot显示剂量依赖性增加。但SAA对CD8⁺T细胞的活化标志物CD25/CD69无影响，证实其作用靶点为内皮细胞而非免疫细胞直接激活。

该研究首次揭示SAA通过"HEV-CD8⁺T_SCM"轴增强免疫治疗的创新机制：①突破性发现传统中药成分可特异性维持HEVs表型；②阐明干细胞样T细胞浸润与HEVs的空间关联；③提供无需直接免疫激活的增效策略，避免免疫相关不良反应。临床转化方面，SAA已用于心血管疾病的安全性基础，与PD-1抑制剂联用可快速进入临床试验。未来需探索HEVs调控的精确分子通路，以及SAA在其他"冷肿瘤"中的应用潜力。