Vero细胞连续传代对孟加拉国PPRV融合蛋白的影响及其在疫苗开发中的潜在应用

本研究针对Peste des petits ruminants virus(PPRV)融合蛋白(F蛋白)在Vero细胞连续传代中的遗传变异与毒力衰减问题，通过60代传代实验发现14个核苷酸和4个氨基酸（位于亮氨酸拉链结构域）的替换，动物实验证实传代病毒可诱导保护性免疫。该成果为基于本土毒株的减毒疫苗开发提供了关键数据，发表于《Irish Veterinary Journal》。

　　

论文解读
在畜牧业高度依赖的南亚地区，小反刍兽疫病毒(PPRV)引发的疫情每年造成数亿美元经济损失。这种高度传染性的莫比病毒属(Morbillivirus)成员，其融合蛋白(F蛋白)如同"分子钥匙"，通过介导病毒与宿主细胞膜融合实现感染。然而，传统疫苗株在异源细胞（如Vero细胞）中传代时，F蛋白关键结构域可能发生变异，导致疫苗效力不稳定。这一科学难题激发了孟加拉国农业大学的Md.Saiful Islam Siddiqui团队开展深入研究。

研究团队采用多学科技术策略：首先从自然爆发的PPRV病例中分离BD_PPR_08毒株，通过Vero细胞连续传代至60代；采用RT-PCR和实时荧光RT-PCR定期监测病毒RNA；对第9代和60代毒株进行F基因测序比对；最后通过山羊免疫实验评估疫苗候选株效果，使用cELISA（竞争性酶联免疫吸附试验）检测抗体水平。关键技术包括病毒传代培养、分子进化分析（MEGA 6.0软件）和动物攻毒实验。

研究结果

病毒传代与适应性变化
连续传代导致Vero细胞病变特征显著改变：从第9代的小规模合胞体形成，发展到60代的大规模细胞融合和单层完全降解。这种形态学变化暗示F蛋白功能可能发生适应性改变。

分子特征分析
测序数据揭示14个核苷酸替换（如5807位A→T、6188位G→A）和4个关键氨基酸替换：

• 第338位脯氨酸→丝氨酸(P338S)
• 亮氨酸拉链结构域（459-480aa）发生三重突变：P471L、R474P、R475I
  系统发育分析显示60代毒株仍属于PPRV IV系，但已形成独立分支，遗传分歧度达2.1%。

免疫原性研究
动物实验取得突破性发现：

1. 60代液态疫苗组（实验I）：4只山羊接种后21天，cELISA显示100%血清转化（竞争百分比CP值16.17-21.34）
2. 冻干疫苗组（实验II）：5只山羊产生同等水平的保护性抗体
   攻毒实验中，未接种对照组出现典型PPR症状（腹泻、淋巴结出血），而疫苗接种组全部获得完全保护。

讨论与意义
该研究首次系统阐明PPRV在Vero细胞传代过程中F蛋白的遗传进化规律。亮氨酸拉链结构域的氨基酸替换（尤其是R474P）可能通过破坏六螺旋束结构降低毒力，同时保留免疫原性。这一发现为"精准减毒"疫苗设计提供了新靶点——通过定向修饰F蛋白特定结构域而非全基因组随机突变，可更安全高效地开发疫苗。

研究建立的冻干疫苗制备工艺（72小时冻存+稳定剂）解决了传统液体疫苗冷链运输难题，对热带地区疫苗普及具有特殊价值。德国Friedrich Loeffler Institute的测序数据验证了突变的可靠性，而动物实验的严格设计（包括未接种对照和野生毒株攻毒）确保了结论的严谨性。

这项发表于《Irish Veterinary Journal》的研究，不仅为孟加拉国本土化PPR疫苗生产奠定基础，其揭示的F蛋白功能域与毒力关联机制，更为其他莫比病毒属疫苗（如麻疹病毒、犬瘟热病毒）的研发提供了新思路。未来研究可进一步解析P471L等突变对F蛋白三维构象的影响，推动结构疫苗学的发展。