单剂量鼻内腺病毒载体疫苗靶向RSV G和M2蛋白：诱导双重免疫应答与交叉保护的新策略

为解决呼吸道合胞病毒（RSV）缺乏有效疫苗的难题，Eunju Jang团队开发了靶向G蛋白（诱导中和抗体）和M2蛋白（激活CD8+ T细胞）的腺病毒载体疫苗。单次鼻内接种可同时激发黏膜IgA、血清IgG及细胞免疫，对RSV A/B亚型均展现显著保护效果，为无针化疫苗设计提供新思路。

　　

呼吸道合胞病毒（RSV）是全球婴幼儿下呼吸道感染的首要病原体，每年导致约3%的6个月以下婴儿住院，老年人和免疫缺陷患者同样面临高风险。尽管科学家们已努力60余年，疫苗研发却屡屡受挫——1960年代甲醛灭活疫苗因引发抗体依赖性增强（ADE）效应而失败，2023年获批的肌肉注射疫苗（如GSK AREXVY）虽填补空白，却无法诱导呼吸道局部免疫。这一困境凸显了开发新型疫苗的紧迫性：理想的RSV疫苗需兼顾安全性、交叉保护性（针对A/B亚型）和黏膜免疫激活能力。

来自梨花女子大学的研究团队另辟蹊径，选择腺病毒载体搭载RSV的G蛋白（介导病毒附着）和M2蛋白（参与转录调控），通过单次鼻内接种实现“双管齐下”的免疫策略。其创新性体现在三方面：1）采用黏膜递送直接激活呼吸道第一道防线；2）组合靶向保守性差异的抗原（G蛋白变异较大，M2高度保守）；3）引入mFcm（突变型Fc受体）和tPA（组织纤溶酶原激活剂信号肽）增强抗原稳定性与分泌效率。相关成果发表于《npj Vaccines》，为无针化RSV疫苗开发树立了新标杆。

关键技术方法
研究采用重组腺病毒（rAd）载体平台，构建表达RSV A2株G蛋白核心片段（131-230 a.a.，融合mFcm和tPA）和M2-1全长的疫苗；通过ELISA检测血清IgG/BALF（支气管肺泡灌洗液）IgA；K^d/M2_82-90四聚体标记M2特异性CD8⁺ T细胞；流式细胞术分析T_RM（CD69⁺CD103⁺）；空斑试验和RT-qPCR定量肺组织病毒载量；BALB/c小鼠模型评估交叉保护。

研究结果

免疫原性验证
Western blot证实rAd-3xGmFcm可高效分泌抗原。疫苗组合比例优化显示，rAd-3xGmFcm与rAd-M2按3:1混合时，既能激发强效G特异性抗体（血清IgG滴度较单用G组提升1.6倍），又可诱导M2特异性CD8⁺ T细胞（占肺T细胞群的2.3%），且T_RM比例达60%以上。

攻毒保护效果
RSV A挑战实验中，G+M2组实现完全病毒清除（空斑检测阴性）；对RSV B虽未完全阻断，但肺病毒载量降低100倍。值得注意的是，M2组分显著提升交叉保护——G+M2组针对RSV B的IgA水平比单用G组高1.9倍，且CD8⁺ T细胞应答强度与RSV A相当。长期保护性实验（84天后攻毒）证实，G+M2组仍维持高效黏膜IgA和T_RM，且体重损失显著低于对照组。

安全性评估
组织病理学显示疫苗仅引起轻度血管周围淋巴细胞浸润，无支气管炎或肺炎迹象。BAL细胞分析未发现嗜酸性粒细胞增多（提示无ADE风险），中性粒细胞比例与对照组无差异，证实疫苗安全性。

结论与意义
该研究开创性证明：单次鼻内接种腺病毒载体疫苗即可协同激活G蛋白介导的体液免疫和M2驱动的细胞免疫，突破传统疫苗对RSV亚型交叉保护的局限。其临床转化潜力体现在：1）无针化给药提升接种依从性；2）双抗原设计规避毒株变异风险；3）长效T_RM形成可能减少加强针需求。未来研究可进一步优化抗原组合（如加入F蛋白保守表位），推动该策略进入临床试验阶段。