模块化组装与免疫评价：抗肺炎克雷伯菌O2血清型的高效生物结合纳米疫苗

为解决抗生素耐药性肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae, Kp）O2血清型感染难题，研究人员通过蛋白糖基化偶联技术（PGCT）和SpyCatcher/SpyTag（SC/ST）正交组装系统，开发了一种基于乙肝病毒核心抗原（HBc）的纳米疫苗（HBc-OPS）。该疫苗通过AS03佐剂显著增强O-多糖（OPS）特异性抗体反应，在小鼠模型中实现100%高剂量致死攻击保护，为低免疫原性多糖疫苗设计提供了新策略。

　　

抗生素耐药性肺炎克雷伯菌（Kp）已成为全球公共卫生重大威胁，其中O2血清型占临床感染的35-59%。尽管其O-多糖（OPS）是疫苗开发的理想靶点，但简单的半乳糖重复结构（[-3)-β-D-Galf-(1-3)-α-D-Galp-(1-]）导致免疫原性低下，传统方法难以诱导有效保护。针对这一挑战，军事医学科学院等机构的研究团队在《npj Vaccines》发表了一项突破性研究，通过模块化组装策略构建了新型生物结合纳米疫苗HBc-OPS，为对抗耐药菌感染提供了创新解决方案。

研究采用三大关键技术：1）蛋白糖基化偶联技术（PGCT）在工程化大肠杆菌中实现OPS与SpyCatcher蛋白的定向偶联；2）利用乙肝病毒核心抗原（HBc）自组装成30纳米颗粒的特性，通过SpyTag/SpyCatcher系统表面展示多糖抗原；3）结合AS03佐剂系统评估免疫增强效果，并通过BALB/c小鼠模型验证保护效力。

HBc-OPS纳米疫苗的制备与表征
通过正交组装策略，将PGCT生产的SpyCatcher-OPS（SC-OPS）与HBc-SpyTag（HBc-ST）纳米颗粒共价连接。电镜显示HBc-OPS保持30纳米球形结构，动态光散射（DLS）检测直径57纳米，且在4℃储存10个月未出现聚集或降解。质谱分析证实OPS链含11-20个重复单元，Western blot显示双抗原特异性反应。

OPS特异性抗体反应与疫苗效力
四剂免疫方案使HBc-OPS组小鼠血清IgG滴度显著高于游离OPS组（P<0.0001）。致死剂量攻击实验（3×10⁷ CFU）中，70%的HBc-OPS免疫小鼠存活，而AS03佐剂组在5.2×10⁷ CFU攻击下实现100%保护。脾脏细菌载量检测显示，佐剂组比非佐剂组降低1个数量级（P<0.01）。

免疫应答机制解析
AS03佐剂通过双重作用增强保护：24小时内诱导IL-6（6倍升高）和IL-5（4倍升高）促进B细胞活化；7天后引流淋巴结中T滤泡辅助细胞（Tfh）比例增加2.5倍，生发中心B细胞（GC B）比例提升3倍。第四剂免疫后3天，佐剂组OPS特异性记忆B细胞数量翻倍，证实其诱导长效免疫的能力。

佐剂比较研究
与传统CpG/Al(OH)₃佐剂相比，AS03使抗体滴度提高8倍（P<0.001），在5.4×10⁷ CFU攻击下存活率达80%，显著优于CpG组的40%。α-生育酚成分可能通过增强抗原提呈细胞摄取和内质网应激反应，激活更广泛的免疫信号通路。

该研究首次证明模块化纳米疫苗可突破Kp O2血清型的免疫原性限制。HBc载体提供T细胞依赖性应答，AS03佐剂通过细胞因子风暴（IL-6/IL-5）和GC反应协同增强保护。相较于Hegerle团队开发的四价O抗原疫苗（仅O1/O3有效），该设计在单血清型疫苗中实现全面保护，为开发覆盖O1/O2/O3/O5的多价疫苗奠定基础。技术层面，PGCT与SC/ST系统的结合使多糖-蛋白结合效率达商业化标准，且稳定性超越传统化学结合疫苗。这项成果不仅为抗耐药菌感染提供新工具，更开创了低免疫原性多糖疫苗的通用开发范式。