新生儿血样干血微量采样技术（PCDBS与VAMS?）在氧脂素UPLC-MS/MS分析中的评估与应用

为解决传统血浆采样方法侵入性强、样本稳定性差的问题，西班牙研究团队首次对比评估了预切干血斑（PCDBS）和容积吸收微量采样（VAMS?）在新生儿脐带血氧脂素（oxylipins）分析中的性能。通过优化LC-MS/MS方法及内标处理流程，证实两种设备可稳定检测nM级氧脂素，为脆弱人群脂质代谢研究提供新工具。

　　

氧脂素（oxylipins）作为多不饱和脂肪酸（ω-3与ω-6系列）的氧化代谢产物，在炎症调控中扮演双刃剑角色——ω-6衍生物促炎，而ω-3衍生物则展现抗炎特性。这类分子虽具重要生理功能，却因易降解、浓度低（nM级）而成为临床检测的"棘手目标"。传统血浆采样需大体积血液、冷链运输，对新生儿等脆弱群体尤为不便。更棘手的是，反复冻融会显著改变氧脂素谱，使得精准检测如同"在流沙上建城堡"。

西班牙卡洛斯三世健康研究所团队在《Analytica Chimica Acta》发表的研究，首次将两种新兴微量采样技术——预切干血斑（Pre-Cut Dried Blood Spots, PCDBS）和容积吸收微量采样（Volumetric Absorptive Micro-Sampling, VAMS?）应用于脐带血氧脂素分析。研究人员开发了超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）方法，通过对比30 μL微量全血样本与两种干血设备的表现，系统评估了内标添加方式、抗氧化剂处理（BHT）及三个月储存稳定性的影响，最终在35例新生儿脐带血样本中验证了技术的临床适用性。

关键技术方法包括：1）建立31种氧脂素的UPLC-MS/MS定量方法，保留时间偏差≤±0.03分钟；2）对比PCDBS与VAMS?在30 μL血样中的回收率；3）优化内标添加策略（避免蒸发步骤）；4）采用BHT抗氧化预处理；5）三个月-20°C储存稳定性测试。

【背景】
研究指出，现有氧脂素检测依赖血浆样本，但新生儿采血需控制在500 μL以下，且缺乏专业设备与人员。干血微量采样（<100 μL）可规避冷链需求，但传统干血斑（DBS）受血细胞比容（HCT）影响显著。PCDBS通过精确切取固定面积改善体积误差，而CE-IVD认证的VAMS?设备则通过多孔亲水头实现±5%的体积精度，跨越20-70% HCT范围。

【结果】
• 方法验证：PCDBS与VAMS?分别实现8种和9种氧脂素的准确定量，浓度范围0.7-6.3 nM，与液态全血结果高度一致。
• 关键发现：内标直接加入提取溶剂会导致显著偏差，而预先处理采样设备可提升准确性；BHT抗氧化处理有效抑制降解；-20°C储存三个月数据稳定。
• 临床验证：在脐带血样本中，12/15-脂氧合酶（12/15-LOX）通路产物表现最佳稳定性，而部分环氧二十碳三烯酸（EETs）在VAMS?中回收率更高。

【结论与意义】
该研究首次证实PCDBS与VAMS?适用于新生儿氧脂素微量检测，解决了传统方法的三大痛点：样本量需求、冷链依赖和HCT影响。特别值得注意的是，内标处理方式的优化将分析误差降低50%以上，而BHT预处理使氧化降解率控制在5%以内。这些发现为早产儿脂代谢研究开辟了新途径——例如通过脐带血氧脂素谱预测炎症风险。未来需推动跨实验室标准化，并开发更高灵敏度的LC-MS/MS技术以覆盖更广谱的氧脂素。正如研究者Alejandro Pinilla-González强调的："这项技术让在产房现场采集研究级脂质样本成为可能，是转化医学的重要里程碑。"