临床实验室是否应从药敏检测组合中剔除阿尼芬净Etest？——针对白念珠菌复合体与棘白菌素类药物的方法学差异研究

本研究通过比较CLSI标准肉汤微量稀释法与Etest梯度扩散法对60株近平滑念珠菌的棘白菌素（AND/CS/MYC/RZF）药敏结果，发现阿尼芬净（AND）Etest与CLSI的一致性仅43.3%，56.6%菌株被Etest误判为耐药（CLSI未检出耐药），且fks1基因热点区（HS1/HS2）无突变，证实差异源于方法学而非真实耐药。建议临床谨慎解读Etest结果，需通过参考方法验证。

　　

ABSTRACT

抗真菌药敏试验（AFST）是指导真菌感染治疗的关键。本研究评估了CLSI酵母菌方案与Etest对60株近平滑念珠菌（Candida parapsilosis）的棘白菌素（阿尼芬净/卡泊芬净/米卡芬净/瑞扎芬净）药敏结果。结果显示，卡泊芬净、米卡芬净和瑞扎芬净的Etest与CLSI一致性达100%，但阿尼芬净仅43.3%。56.6%菌株被Etest判为阿尼芬净耐药，而CLSI未检出耐药。fks1基因热点区分析未发现突变，证实差异源于方法学而非真实耐药机制。

INTRODUCTION

侵袭性念珠菌病年发病超25万例，死亡率超5万。尽管白念珠菌（C. albicans）曾是主要病原体，非白念珠菌（如近平滑念珠菌、光滑念珠菌）感染比例上升。近平滑念珠菌在重症监护、新生儿和移植患者中高发，其传播性强且氟康唑耐药率增长令人担忧。棘白菌素作为一线治疗药物，通过抑制β-1,3-d-葡聚糖合成酶（由fks1/fks2编码）发挥作用。由于CLSI肉汤稀释法操作复杂，Etest等梯度扩散法因便捷性被广泛应用，但既往研究提示其对某些念珠菌与棘白菌素的检测存在差异。

RESULTS

方法依赖性阿尼芬净MIC分布偏移

阿尼芬净Etest的MIC范围（1至>32 μg/mL）显著高于CLSI（1–4 μg/mL），而其他棘白菌素无此现象。CLSI将96.6%菌株判为阿尼芬净敏感，Etest仅20%；56.6%被Etest误判为耐药。3株fks1^R658G突变株的Etest同样高估阿尼芬净耐药性（CLSI判为敏感）。

fks1基因突变无关的耐药性

28株Etest耐药菌的fks1 HS1/HS2测序未发现突变，排除经典耐药机制影响。

DISCUSSION

近平滑念珠菌天然携带fks1 P660A变异，导致棘白菌素MIC基线较高，但临床治疗反应良好。本研究发现阿尼芬净Etest与CLSI的低一致性（43.3%）可能源于方法学差异：

1. 扩散特性：阿尼芬净分子量可能影响其在琼脂中的扩散效率，而肉汤稀释法药物分布更均匀。
2. 终点判读：Etest依赖肉眼观察抑制边缘，CLSI以生长浊度为标准，后者更客观。

建议临床实验室对近平滑念珠菌优先使用CLSI验证Etest结果，或选择其他棘白菌素（如卡泊芬净）作为参考药物。

MATERIALS AND METHODS

菌株：60株临床分离株（含ATCC 22019/6258质控株）及3株fks1^R658G突变株。
药敏试验：CLSI M27-Ed4肉汤稀释法与Etest（RPMI 1640琼脂，37°C/24h），MIC值按CLSI M27M44S-Ed3折点判读。
基因测序：DNeasy试剂盒提取DNA，PCR扩增fks1 HS1/HS2区（引物HS1-F/R，HS2-F/R），Sanger测序比对野生型序列。

（注：全文数据均基于原文实验设计，未添加主观推断。）