中国湖北新分离胞内劳森菌LI-HuB23的分离培养、传代特性及致病性研究

本文报道了中国湖北地区新分离的胞内劳森菌（Lawsonia intracellularis）菌株LI-HuB23的成功分离与特性研究。该研究通过IEC-18细胞连续传代培养（>30代），结合透射电镜（TEM）、间接免疫荧光（IFA）及aspA基因测序验证，首次系统评估了该菌株的致病性。动物实验显示，口服接种6.9×108 TCID50可诱导仔猪腹泻、生长抑制（ADG降低14.6%）及典型回肠增生性病变，为猪增生性肠病（PPE）疫苗研发提供了关键候选株。

　　

1. 引言
猪增生性肠病（Porcine proliferative enteropathy, PPE）是由专性胞内寄生的革兰阴性菌——胞内劳森菌（Lawsonia intracellularis）引起的全球性猪肠道疾病，临床表现为急性出血性、慢性腺瘤性及亚临床感染三种形式。该菌难以在常规培养基中培养，需依赖IEC-18、McCoy等特定真核细胞系及微需氧环境（8% O₂, 8.8% CO₂）。中国作为全球最大养猪国，此前仅有一例菌株分离报道。本研究从湖北屠宰场1574份回肠样本中筛选阳性样本，成功分离一株可稳定传代的菌株LI-HuB23。

2. 材料与方法
通过qPCR靶向aspA基因（引物：CCTTGGAGGTAAATTGATTTCTCC/ATGTTCAGCTTTCTGGTGTTCTTA）初筛出104份阳性样本。采用胰酶消化+梯度过滤（0.65-100 μm）结合SPG缓冲液处理，接种IEC-18细胞（ATCC CRL-1589），在微需氧条件下连续传代。通过TEM观察菌体形态（1.25-1.75×0.25-0.43 μm弯曲杆状），IFA（单抗C17）检测细胞内增殖（>30菌体/细胞），TCID₅₀法测定滴度（10^5.55/mL）。动物实验选用28日龄仔猪，口服接种6.9×10⁸菌体，监测粪便排菌（qPCR）、血清IgG（IFA）及病理变化（H&E染色、IHC）。

3. 结果
3.1 菌株分离与鉴定
LI-HuB23在传代10代后仍保持稳定增殖（Ct值25），电镜显示典型形态，aspA基因系统发育分析显示与PPE-GX01-2022、N343等菌株高度同源。制备的单抗C17可特异性识别22 kDa蛋白，与商业抗体BIO323等效。

3.2 致病性评估
接种后4天即检测到粪便排菌（峰值8×10⁵/g），14-28天出现水样腹泻。攻毒组平均日增重（ADG）较对照组降低35.38 g（p<0.01）。病理显示回肠隐窝增生伴杯状细胞减少，IHC证实菌体定植。值得注意的是，细胞传代菌株的致病性较临床原始株有所减弱，提示体外适应可能导致毒力衰减。

4. 讨论
本研究突破性解决了胞内劳森菌分离培养的技术瓶颈，首次实现中国流行株的长期传代（>30代）。LI-HuB23的稳定增殖特性为疫苗研发（如灭活苗或弱毒活苗）奠定基础，其诱导的亚临床感染模型更贴近田间实际。单抗C17的制备为诊断试剂开发提供了核心工具。

5. 结论
LI-HuB23的成功分离填补了中国PPE病原研究的空白，其稳定的体外增殖能力和可重复的致病表型，使其成为疫苗研发和发病机制研究的理想材料。后续研究可聚焦毒力基因筛选及免疫保护效力评估。