ARHGAP40甲基化ctDNA：高分级浆液性卵巢癌早期诊断的新型无创生物标志物

本研究针对卵巢癌早期诊断难题，发现ARHGAP40基因启动子区CpG岛高甲基化导致其在93.8%的高分级浆液性癌(HGSC)中表达沉默，并首次开发MethyLight技术检测血浆ctDNA中甲基化ARHGAP40片段，在80% HGSC患者中实现特异性检出。该成果为卵巢癌液体活检提供了新靶点，发表于《Journal of Ovarian Research》。

　　

卵巢癌被称为"沉默的杀手"，70%患者确诊时已进展至晚期，5年生存率不足30%。这种严峻现状的核心矛盾在于：现有CA125等血清标志物对早期病变灵敏度不足，而影像学检查难以发现微小病灶。更棘手的是，占卵巢癌70%的高分级浆液性癌(HGSC)具有独特的分子特征——96%存在TP53突变，却缺乏像低分级浆液性癌(LGSC)中BRAF/KRAS突变那样的明确驱动基因。表观遗传学领域的最新进展提示，DNA甲基化可能是破解这一难题的钥匙。

南京大学医学院附属金陵医院病理科团队在《Journal of Ovarian Research》发表的研究，将目光聚焦于Rho GTP酶激活蛋白家族成员ARHGAP40。前期工作已发现该基因在基底细胞癌中因启动子高甲基化而沉默，但在卵巢癌中的表现仍是空白。研究人员收集了80例福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织样本（包括正常输卵管、良性肿瘤、交界性肿瘤、LGSC和HGSC）和23例外周血样本，采用免疫组化(IHC)、亚硫酸氢盐测序PCR(BSP)和创新的MethyLight技术展开系统研究。

关键技术方法包括：1）免疫组化评估不同病理类型中ARHGAP40蛋白表达；2）BSP分析启动子区CpG岛甲基化状态；3）开发MethyLight检测体系定量血浆ctDNA中甲基化ARHGAP40片段。样本来源于南京两家医院2020-2024年间的临床队列。

Expression of ARHGAP40 protein in FFPE specimens
免疫组化显示ARHGAP40在正常输卵管(15/15)和良性肿瘤(8/8)中均强阳性表达（评分3+），交界性肿瘤(16/18)和LGSC(6/7)多数保持表达，而93.8% HGSC(30/32)呈现阴性或弱阳性（评分0/1+）。这种表达缺失与临床分期显著相关（P<0.001），提示其可能参与肿瘤恶性进展。

Hypermethylation of CpG Island
BSP检测揭示ARHGAP40启动子区CpG岛在HGSC中呈现密集甲基化（图2C），而正常组织中保持非甲基化状态（图2B）。甲基化程度与蛋白表达呈显著负相关（P<0.001），证实表观遗传沉默是该基因失活的主要机制。

Detection of methylated ARHGAP40 in cfDNA
创新的MethyLight检测在80% HGSC患者血浆(4/5)中检出甲基化ARHGAP40 ctDNA，而健康对照(0/15)和良性肿瘤患者(0/3)均为阴性。测序验证显示该方法可特异性识别低丰度甲基化DNA片段。

这项研究首次阐明ARHGAP40在HGSC中通过启动子高甲基化发生表观遗传沉默，其甲基化ctDNA检测具有重要临床价值：1）为HGSC与LGSC/交界性肿瘤的鉴别诊断提供分子标志物；2）液体活检策略克服了组织取材局限性；3）MethyLight技术灵敏度达80%，优于传统CA125在早期病例中的表现。值得关注的是，该研究样本量较小（尤其血浆样本仅5例HGSC），未来需扩大验证。但毋庸置疑，这项工作为卵巢癌早期诊断开辟了新途径——将表观遗传改变转化为可操作的临床工具，正如讨论部分强调的："甲基化ARHGAP40 ctDNA可能成为HGSC无创诊断和监测的生物标志物"。