坦桑尼亚儿童疟疾患者中青蒿素及其联合用药耐药标记的分子流行病学研究（2016-2022）

本研究针对坦桑尼亚儿童疟疾患者中青蒿素部分耐药（AR）和联合用药耐受性风险，通过分析Pfk13和Pfmdr1基因突变及多重感染（MOI）动态，首次在姆万扎地区发现WHO确认的耐药标记Pfk13 R561H（1.4%），并揭示Pfmdr1 N86野生型100%流行提示卢美芬汀耐受性增强。MOI稳定在1.5表明低传播强度，为东非抗疟药物耐药监测提供关键基线数据。

　　

在非洲疟疾防控的战场上，青蒿素联合疗法（ACT）曾是所向披靡的武器。然而随着青蒿素部分耐药（AR）在东南亚的蔓延，这个"恶魔"如今已悄然登陆非洲大陆。坦桑尼亚作为全球疟疾负担第五大国，每年近200万病例中儿童首当其冲。更令人担忧的是，2021年该国卡盖拉地区已确认出现AR标记Pfk13 561H突变，而姆万扎作为东非交通枢纽，可能成为耐药寄生虫传播的"中转站"。面对这一严峻形势，德国美因茨大学医学中心联合坦桑尼亚天主教健康与联合科学大学的研究团队，对2016-2022年间姆万扎地区173例儿童疟疾样本展开追踪，研究成果发表于《Malaria Journal》。

研究采用多重RT-PCR-ELISA进行疟原虫筛查，通过巢式PCR分析Pfmsp1/Pfmsp2多态性标记评估MOI（样本来自姆万扎三家医疗机构），采用Sanger测序检测Pfk13（440-680密码子）和Pfmdr1（1106-1298密码子）关键突变。所有实验均以P. falciparum实验室株NF54为对照。

多样性分析与感染复杂性
在168例成功分型的样本中，K1（67.4%）和3D7（56.3%）分别是Pfmsp1和Pfmsp2的优势等位基因。MOI均值稳定在1.5（2016-2022年p=0.7），单克隆感染占59.3%，提示当地疟疾传播强度持续较低。值得注意的是，城乡医疗机构的MOI无显著差异（1.6 vs 1.4, p=0.12），这与高传播区常见的年龄-MOI负相关模式形成对比。

青蒿素耐药标记谱
143例Pfk13测序样本中，7%携带非同义突变，包括两例WHO确认的AR标记R561H（2022年检出，均来自基戈马地区患儿）。其他突变如A578S（2.8%）位于与耐药相关的螺旋桨结构域，但临床意义尚不明确。研究特别指出，由于患儿流动史不详，无法确定561H是本地传播还是输入病例，突显交通枢纽地区耐药监测的特殊挑战。

联合用药耐受性特征
Pfmdr1测序显示所有样本均保留N86野生型（与卢美芬汀敏感性降低相关），184F突变率达43.3%。这种基因型组合与东非ACT疗效下降的报道相符，为"青蒿素耐药可能加速联合药物失效"的假说提供了佐证。

该研究首次系统描绘了姆万扎地区儿童疟原虫种群动态：虽然MOI低于邻区提示防控成效，但AR标记的出现敲响警钟。尤其2022年检出561H突变（尽管可能为输入病例），强调需建立跨境耐药监测网络。Pfmdr1野生型N86的固存现象，则为优化ACT方案提供分子依据。作者建议未来研究应扩大样本量、纳入无症状携带者，并增加Pfcrt、Pfmdr1拷贝数等标记分析。这项历时6年的监测为东非抗疟战线提供了关键"雷达图"——在耐药突变星火燎原前，科学的预警或许能改写非洲疟疾防控的历史轨迹。