中国新疆地区首株牛结节性皮肤病病毒(XJ/2019)的分离鉴定与致病性研究

本文首次报道了中国新疆地区牛结节性皮肤病病毒(LSDV)毒株XJ/2019的分离鉴定，通过全基因组测序证实其为南非和欧洲毒株的重组体，动物实验显示静脉接种可诱发典型临床症状（发热、皮肤结节、鼻炎），为国内LSD防控提供重要病原学依据。

　　

1. 引言
牛结节性皮肤病(LSD)是由痘病毒科(Poxviridae)山羊痘病毒属(Capripoxvirus)的LSDV引起的烈性传染病。2019年8月中国新疆伊犁暴发首例疫情后，研究团队从病牛皮肤样本中分离获得XJ/2019毒株。该病毒通过节肢动物媒介传播，基因组为151kbp的双链DNA，编码156种推定蛋白，与山羊痘、绵羊痘病毒存在交叉保护但难以血清学区分。

2. 材料与方法
在生物安全三级(BSL-3)实验室中，采用羔羊睾丸(LT)细胞培养分离病毒，通过PCR扩增P32基因(引物5′-TCC-GAG-CTC-TTT-CCT-GAT-TTT-TCT-TAC-TAT-3′)、免疫荧光(IFA)和电镜观察病毒形态。动物实验将13头黄牛分为静脉接种组(I组)、皮内接种组(II组)和对照组(III组)，接种剂量为10^6.5 TCID₅₀。采用qPCR(检测限10拷贝/反应)和ELISA监测病毒载量与抗体动态。

3. 结果
3.1 病毒特征
电镜观察到典型痘病毒颗粒：胞内成熟病毒(IMV)、胞外包膜病毒(EEV)等四种形态。LT细胞感染后第5天病毒滴度达10^6.79 TCID₅₀/mL。基因组A+T含量74.2%，与俄罗斯Saratov/2017株相似度最高，系统发育分析显示其与中国、东南亚毒株形成独立进化分支。

3.2 致病性
I组80%牛只(4/5)出现40°C高热、全身性皮肤结节(第8天)、淋巴结肿大；II组仅40%(2/5)出现局部症状。qPCR检测显示I组病毒血症持续14天，鼻拭子病毒载量高达10^6.01拷贝/mL。组织分布检测发现淋巴结、皮肤结节中病毒载量最高。

3.3 免疫应答
ELISA检测显示I组抗体阳转率80%(4/5)，中和抗体效价1:42；II组阳转率40%(2/5)，效价1:16。抗体水平与临床症状严重程度呈正相关。

4. 讨论
XJ/2019作为中国首株LSDV分离株，其重组特性提示可能源于疫苗株与野毒株的基因重组。静脉接种比皮内接种更易诱发全身感染，这与病毒经吸血昆虫传播的自然感染途径相符。研究为LSD疫苗研发提供了关键毒株资源，强调需加强边境地区疫情监测。

5. 结论
该研究证实XJ/2019是高致病性重组毒株，明确了不同接种途径的致病差异，为制定科学防控策略奠定基础。