双药联用策略通过促进血管再生与抑制卵泡过度激活增强冷冻卵巢功能

为解决卵巢组织冷冻移植(OTCT)后卵泡快速耗竭的临床难题，中国农业大学团队开展了一项创新性研究。研究人员通过蛋白质组学分析和三维高分辨率成像技术，揭示了冷冻损伤导致血管尖端细胞(tip cell)破坏和原始卵泡过度激活的双重机制，进而开发出血管内皮生长因子(VEGFA)联合雷帕霉素(rapamycin)的双药策略(VRCS)。该方案显著提高了移植后卵泡存活率，延长了生殖功能维持时间达4个月，为癌症患者的生育力保存提供了新思路。研究成果发表于《Reproductive Biology and Endocrinology》。

　　

在女性癌症患者的生育力保存领域，卵巢组织冷冻移植(OTCT)技术因其能同时保存卵泡和内分泌功能而备受关注。然而临床数据显示，移植后的卵巢组织平均仅能维持2-5年的功能，这主要归因于两个关键瓶颈：移植后急性缺血导致的血管再生障碍，以及机械操作和冷冻过程引发的原始卵泡(primordial follicle)过度激活。这些因素共同导致卵巢储备的快速耗竭，严重限制了该技术的临床应用价值。

中国农业大学张华团队联合多家机构，在《Reproductive Biology and Endocrinology》发表了一项突破性研究。研究人员利用PD21青春期小鼠卵巢模型，通过蛋白质组学、高分辨率三维成像等技术创新性地揭示了OTCT后卵泡快速丢失的分子机制。研究发现冷冻过程特别容易损伤血管尖端细胞——这些具有丝状伪突的"开路先锋"细胞密度降低了76%，远高于成熟血管17%的损伤率。同时，机械操作和冷冻应激会激活mTORC1-PI3K-FOXO3A信号通路，促使原始卵泡提前进入生长阶段。

研究团队采用三种关键技术方法：1) 利用Tek-CreERT2;mTmG转基因小鼠进行血管网络可视化；2) 基于组学技术筛选差异表达蛋白；3) 建立肾包膜下移植模型评估生殖功能。通过优化冷冻保护剂配方，在全程添加500 nM雷帕霉素抑制卵泡激活，并在移植前用5 ng/mL VEGFA预处理，创建了VEGFA-雷帕霉素联合策略(VRCS)。

研究结果部分：
快速卵泡丢失与血管损伤和异常卵泡激活相关
移植后3天内，冷冻卵巢的卵泡日损耗率达24.71%，显著高于新鲜组织的17.58%。蛋白质组分析发现610个差异蛋白，其中血管生成相关通路(HIF-1、VEGF)和卵泡激活通路(PI3K-Akt、FoxO)显著改变。

冷冻诱导的尖端细胞损伤加剧血管再生障碍
三维成像显示冷冻卵巢的尖端细胞密度仅为新鲜组织的23.92%，移植后3天血管密度(32.97%)仍显著低于新鲜移植组(58.35%)。免疫荧光证实冷冻使49.18%原始卵泡的FOXO3A蛋白发生核质转位，表明激活状态。

双药联用策略的协同保护效应
VRCS处理使移植后3天的卵泡存活数提高31%(1197 vs 916个)，日损耗率降至18.84%。移植14天后仍保留329.4个原始卵泡，较单药组增加25%。超排卵实验显示VRCS组的获卵数(3.63/卵巢)和囊胚形成率(46.25%)均显著提高。

长期生殖功能维持
长达4个月的观察显示，VRCS组小鼠持续保持规律动情周期，卵巢内保留283个各级卵泡，其中原始卵泡达92.75个，显著优于单药组(151.5个)和对照组(74.5个)。

该研究首次阐明尖端细胞损伤是影响卵巢移植后血管重建的关键因素，并创新性地提出时空差异给药策略：雷帕霉素全程抑制卵泡过度激活，VEGFA短期促进血管再生。这种双靶点干预方案使冷冻卵巢的功能维持时间延长至临床相关周期，为改善癌症患者生育力保存结局提供了重要理论依据和实践方案。特别值得注意的是，VRCS在提高卵泡数量的同时显著改善了卵母细胞质量，这为解决OTCT技术中"量质不同步"的难题提供了新思路。未来研究可进一步优化药物配伍比例，并在灵长类模型中验证其安全性。