单细胞测序揭示HR+乳腺癌免疫治疗响应的外周免疫动态特征

本研究针对激素受体阳性(HR+)乳腺癌患者对免疫检查点抑制剂(ICI)响应率低的临床困境，通过单细胞RNA测序(scRNA-seq)和T细胞受体(TCR)测序技术，对接受新辅助nab-紫杉醇+帕博利珠单抗治疗的28份外周血样本(79,284个细胞)进行纵向分析。研究发现响应患者外周血中Granzyme B+(GZMB+)细胞毒性CD8+ T细胞扩增伴随TCR克隆快速更替，而B细胞/单核细胞的干扰素反应特征与治疗响应正相关。该成果为HR+乳腺癌免疫治疗提供了潜在的血浆生物标志物，发表于《npj Breast Cancer》。

　　

激素受体阳性(HR⁺)乳腺癌占乳腺癌病例的75%，传统上被认为是免疫"冷"肿瘤，对免疫治疗响应有限。尽管近期临床试验显示化疗联合免疫检查点抑制剂(ICI)能提高病理完全缓解(pCR)率，但伴随的免疫相关毒性凸显了生物标志物开发的紧迫性。癌症免疫循环理论指出，局部抗肿瘤免疫需要与外周免疫系统持续互动，这为通过外周血监测治疗响应提供了理论依据。

Dana-Farber癌症研究所等机构的研究团队对7例HR⁺/HER2^-乳腺癌患者(临床试验NCT02999477)的28份纵向外周血样本进行单细胞多组学分析。研究发现响应患者(RCB 0/I)外周血中GZMB⁺早期活化CD8⁺ T细胞显著扩增，TCR克隆呈现快速更替特征；而非响应者(RCB II/III)的T细胞则表现出终末耗竭状态。单核细胞HLA-DR表达和B细胞CD83激活标志物与治疗响应正相关。该研究首次系统描绘了HR⁺乳腺癌免疫治疗的外周免疫动态图谱，为开发无创监测手段奠定基础，成果发表于《npj Breast Cancer》。

关键技术包括：1)从临床试验NCT02999477获取治疗前后4个时间点的外周血单个核细胞(PBMC)；2)10X Genomics单细胞5'RNA-seq和TCR-seq；3)Seurat软件进行细胞聚类和差异基因分析；4)MiXCR解析肿瘤TCR序列；5)ssGSEA计算干扰素反应评分。

化疗诱导单核细胞减少和炎症反应下调被ICI逆转
伪批量分析显示化疗后补体系统和炎症反应基因显著下调，ICI治疗使其恢复。流式证实化疗后经典/非经典单核细胞比例下降，ICI治疗后回升。

CD8⁺ T细胞特征与临床响应相关
鉴定出6个CD8⁺ T细胞亚群，其中GZMB⁺晚期活化/效应记忆样亚群在非响应者中富集。响应者表现出GZMB⁺早期活化亚群扩增和TCR克隆快速更替(仅3.9%克隆纵向共享)，而非响应者维持静态高克隆性(13%克隆共享)。

单核细胞和B细胞的动态变化
响应者基线单核细胞即高表达HLA-DR和干扰素反应基因。化疗后其B细胞CD83(激活标志物)显著上调，而ICI选择性地降低非响应者B细胞比例。

该研究创新性地揭示外周免疫动态与HR⁺乳腺癌免疫治疗响应的关联：1)GZMB⁺CD8⁺ T细胞亚群比例和TCR克隆动态可作为响应标志物；2)单核细胞MHC-II和B细胞干扰素反应预示治疗敏感；3)为开发包含ctDNA和PBMC的无创预测panel提供理论依据。研究局限性包括样本量小和回顾性设计，但建立的高分辨率数据集为后续大样本验证提供重要参考。随着ICI在TNBC和HR⁺乳腺癌中的应用扩展，该成果对实现精准免疫治疗具有重要转化价值。