MIC测试条在耳念珠菌抗真菌药敏检测中的国际多中心评估：方法学比较与临床意义

【编辑推荐】本研究通过对比MIC测试条（MTS）与CLSI参考肉汤微量稀释法（BMD），评估了MTS对100株国际多谱系耳念珠菌（Candida auris）的药敏检测性能。结果显示，MTS可准确识别氟康唑和棘白菌素耐药（含FKS1突变株），但需采用方法特异性野生型上限值（WT-ULV=4 mg/L）校正两性霉素B的假阳性耐药结果，为临床实验室提供重要技术优化依据。

　　

ABSTRACT
研究团队通过国际多中心合作，评估了MIC测试条（MTS）对耳念珠菌（Candida auris）的抗真菌药敏检测性能。该病原体因对多类抗真菌药物（包括棘白菌素、唑类和两性霉素B）的耐药性被WHO列为紧急威胁病原体。研究纳入100株涵盖5个进化枝的菌株，比较MTS与CLSI肉汤微量稀释法（BMD）的结果差异。

CLSI AFST
参考方法显示，两性霉素B和5-氟胞嘧啶的MIC分布呈单峰窄谱（3-4个二倍稀释梯度），而唑类药物呈现多峰分布。棘白菌素对野生型菌株的MIC范围为0.016-1 mg/L，但FKS1突变株（S639F/P/T/Y、M690V、Δ635F）的MIC显著升高至1->8 mg/L。值得注意的是，83%菌株对氟康唑耐药（MIC>64 mg/L），且与其它唑类MIC呈正相关。

MTS AFST
MTS检测中，两性霉素B的MIC中位数较CLSI高1个二倍稀释度（1 vs 0.5 mg/L），导致34%假阳性耐药（CA仅66%）。采用MTS特异性WT-ULV（4 mg/L）可将分类一致性提升至98%。棘白菌素检测表现优异（CA 95%-99%），且能100%识别FKS1突变株——其MTS MIC均>32 mg/L，优于CLSI方法（漏检率18%-27%）。氟康唑检测准确率达98%，仅1例假阴性和1例假阳性。

关键发现

1. 两性霉素B：MTS高估耐药性现象在进化枝I菌株中最显著（68%假阳性），可能与菌株在液体培养基中的生长特性相关（如AUH2751菌株OD_530nm值异常低）。
2. 棘白菌素：MTS对FKS1突变株的识别灵敏度优于CDC暂定折点（4 mg/L）和CLSI ECV（1 mg/L），提示现行标准需修订。
3. 方法学差异：MTS对唑类和5-氟胞嘧啶的MIC普遍高于CLSI（差异达9个二倍稀释度），可能与琼脂扩散法的药物释放动力学有关。

DISCUSSION
该研究首次系统评估了MTS在全球不同进化枝耳念珠菌检测中的适用性。临床实验室需注意：

• 两性霉素B结果应结合WT-ULV（4 mg/L）判读
• 棘白菌素MTS MIC>0.25 mg/L提示FKS1突变风险
• 双次接种法可能加剧两性霉素B假阳性，需标准化操作流程

MATERIALS AND METHODS
研究采用严格质量控制：

• 菌株涵盖5个进化枝（I-V）及11株FKS1突变株
• CLSI M27A4标准与MTS同步检测10种抗真菌药物
• ECOFFinder程序计算WT-ULV，统计学终点设为95%-99.9%

该成果为耳念珠菌的精准药敏检测提供了重要技术规范，尤其对资源有限地区实验室具有实践指导价值。未来需开展多中心验证以确立普适性ECVs。