唾液腺分泌性癌的实用病理诊断方法：基于ETV6::NTRK3融合基因与免疫组化组合策略的创新研究

针对唾液腺分泌性癌(SC)与腺泡细胞癌(AciCC)鉴别诊断的临床难题，日本岐阜大学等机构通过ETV6断裂荧光原位杂交(FISH)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术，结合免疫组化(IHC)组合分析，证实S-100/ mammaglobin/GATA3联合标记可高效区分SC（敏感性76.2%/特异性100%），为NTRK/RET靶向治疗筛选提供经济快速的预筛方案。

　　

唾液腺肿瘤诊断领域长期存在一个"身份混淆"难题——形态学相似的分泌性癌(SC)和腺泡细胞癌(AciCC)却对应着截然不同的治疗策略。这种困扰自2010年SC被正式命名前就已存在，当时大量SC被误诊为AciCC的变异亚型。随着NTRK抑制剂entrectinib/larotrectinib和RET抑制剂selpercatinib等靶向药物问世，精准鉴别这两种肿瘤直接关系到患者的生存获益。然而，金标准的基因检测(FISH/RT-PCR)在临床实践中常受限于时间和成本，迫使病理学家们寻求更高效的诊断工具。

为破解这一困境，岐阜大学联合东北大学等机构的研究团队开展了一项跨越20年的回顾性研究。通过对31例初诊为AciCC/SC的病例进行基因重排验证和免疫组化标志物筛选，最终建立了一套经济高效的诊断流程。研究采用ETV6断裂探针FISH和嵌套RT-PCR检测经典ETV6::NTRK3融合（外显子5::15）及其他罕见变异，同时系统评估了pan-Trk、S-100等6种抗体的诊断效能。来自日本多家医疗中心的样本队列（27例腮腺、1例颌下腺、3例小唾液腺）确保了结论的临床代表性。

主要技术方法
研究团队采用多中心回顾性设计，对1993-2023年间31例FFPE样本进行基因型-表型关联分析。关键技术包括：Vysis LSI ETV6断裂探针FISH（阈值10%）、巢式RT-PCR检测ETV6::NTRK3/RET融合转录本（引物参照Skalová方案）、Sanger测序验证，以及自动化IHC平台评估S-100/mammaglobin等6种标志物（阳性阈值5%）。统计学采用R语言进行逻辑回归模型构建。

研究结果
3.1 FISH分析
26例可评估样本中，所有8例AciCC均显示ETV6野生型信号，而SC病例呈现典型断裂模式（分离的红/绿信号）。5例因核酸降解需依赖RT-PCR补充诊断。

3.2 RT-PCR和DNA测序
21例SC均检出ETV6::NTRK3融合（外显子5::15），未发现ETV6::RET等其他变异。值得注意的是，12例中仅3例FISH阳性病例能通过初级PCR检出，凸显巢式PCR对陈旧样本的诊断价值。

3.3 临床特征
基因分型纠正了17例误诊（原4例SC增至21例）。SC患者更年轻（中位53 vs 69岁，p=0.0424），且集中于腮腺（95.2% vs 70%，p=0.0267）。尽管6例接受术后放疗，两组5年生存率无差异（p=0.317）。

3.4 免疫组化模型
突破性发现在于：S-100/mammaglobin双阳性对SC诊断特异性达100%（阳性预测值100%），其强度分级（+++/++）与基因检测结果高度吻合。相比之下，曾被寄予厚望的pan-Trk出现13/18 SC与3/8 AciCC共表达，诊断价值有限（p=0.1892）。GATA3虽在SC中高表达（20/21），但存在4/8 AciCC假阳性。

讨论与意义
这项研究首次系统论证了IHC组合替代基因检测的可行性：当S-100与mammaglobin均呈中度以上阳性时，诊断SC的准确率接近100%。这一发现具有三重临床价值：

1. 经济性：相较于单次FISH检测约500美元的成本，IHC组合可将初筛费用降低90%
2. 时效性：IHC 24小时出报告，而基因检测通常需3-5个工作日
3. 治疗指导：快速筛选NTRK/RET融合候选病例，为靶向治疗争取时间

研究同时揭示了当前诊断体系的局限：约5% SC可能携带ETV6::RET等非典型融合，需结合NR4A3/NR4A2检测排除AciCC。未来研究应扩大样本量验证VIM::RET等新型融合的免疫组化特征。

这项发表于《Discover Oncology》的研究为唾液腺肿瘤精准诊断树立了新标准，其创新性在于将复杂的分子病理转化为基层医院可实施的标准化流程。随着NTRK靶向疗法纳入医保，该成果有望惠及更多患者，实现从形态学诊断到"治疗可及性"的跨越。