基于金属离子信号干扰机制研究及血浆中痕量海曲波帕(Hetrombopag)稳健LC-MS/MS分析方法的建立

本研究针对金属敏感型药物海曲波帕(Hetrombopag)在生物样本分析中因痕量金属离子导致的信号不稳定问题，通过开发含0.01%三氟乙酸(TFA)的流动相和6%高氯酸-乙腈预处理体系的双重策略，建立灵敏度达0.10 ng/mL的LC-MS/MS方法，成功应用于犬药代动力学研究，为金属螯合类化合物的分析提供新范式。

　　

血小板减少症是临床常见的血液系统疾病，表现为循环血小板数量异常降低，严重时可导致自发性出血。传统治疗手段如脾切除术存在创伤风险，而第一代血栓生成素受体激动剂(TPO-RA)艾曲波帕(Eltrombopag)虽能刺激血小板生成，但存在肝毒性和白内障风险。我国自主研发的新一代TPO-RA海曲波帕(Hetrombopag)具有更强的药理活性（效力为艾曲波帕的8-10倍），但其分子结构中含铁螯合域，使得痕量金属离子极易干扰分析结果——这就像给精密的天平掺入了看不见的沙粒，导致色谱峰拖尾、回收率波动等"幽灵问题"。

江苏恒瑞医药有限公司的研究团队发现，当血浆样本中存在1 ppm Fe²⁺时，海曲波帕的HPLC保留时间会从1.95分钟异常缩短至1.24分钟，几乎完全转化为铁螯合物。这种"变形记"般的现象在开发超灵敏检测方法时（尤其是低于1 ng/mL水平）构成巨大挑战，因为金属离子无处不在——从色谱系统、玻璃容器到质谱喷雾针都可能成为干扰源。

研究团队创新性地采用双重防御策略：流动相中添加0.01%三氟乙酸(TFA)作为"分子盾牌"抑制色谱系统内的金属螯合，而6%高氯酸-乙腈溶液则充当"清洁剂"消除储存容器吸附。通过优化InfinityLab Poroshell 120 EC-C18色谱柱（50℃柱温）和含异丙醇的梯度系统，成功将干扰峰与目标峰分离。该方法仅需50 μL血浆即可达到0.10 ng/mL的定量下限，精密度(RSD≤8.83%)和准确度(88.4-102.2%)均符合要求。在比格犬药代动力学研究中，该方法成功追踪了3次给药（每次2.5 mg片剂）后的血药浓度变化。

关键技术包括：1）采用电喷雾电离(ESI)正离子模式监测海曲波帕特征离子对(459.1/201.1定量，459.1/219.1确认)；2）比较7种C18色谱柱分离性能；3）建立含10 mM甲酸铵的二元梯度系统（水:甲醇:异丙醇=1:10:10）；4）通过添加实验验证金属离子干扰机制。

主要研究结果：
• 金属干扰机制：证实Fe²⁺通过形成螯合物改变保留行为，玻璃容器吸附是信号衰减主因
• 方法学验证：线性范围跨越3个数量级，LLOQ较文献方法提升10倍
• 实际应用：首次揭示海曲波帕在犬体内的药时曲线特征

这项发表于《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》的研究不仅解决了海曲波帕分析的技术瓶颈，更创立了金属敏感化合物分析的通用策略。正如通讯作者han jiangbin强调的，该工作为后续建立"金属干扰-信号响应"预测模型奠定了基础，对改善螯合类抗癌药、抗生素等分析具有范式意义。值得注意的是，团队特别避讳使用传统螯合剂EDTA（会残留抑制信号），而选择酸性添加剂这种"温和而高效"的解决方案，体现了对分析化学本质的深刻理解。