口腔鳞癌无创诊断新突破：巴基斯坦首证ctDNA作为OSCC诊断标志物的临床价值

为突破传统口腔鳞癌（OSCC）诊断依赖有创活检的局限，巴基斯坦开伯尔医学院团队开展病例对照研究，首次在本地人群中量化循环肿瘤DNA（ctDNA）水平。研究发现OSCC患者血浆ctDNA浓度（37.52±8.71 ng/mL）显著高于健康对照组（11.00±6.39 ng/mL, p<0.001），且不受年龄、性别及肿瘤分化程度影响。该成果发表于《BMC Oral Health》，为OSCC微创早期诊断提供了首个巴基斯坦人群证据，推动液体活检技术临床应用。

　　

论文解读

研究背景与意义

口腔鳞状细胞癌（OSCC）占全球口腔癌的90%，在巴基斯坦呈爆发性流行，男性年龄标化发病率（ASIR）高达88.1/10万，居所有癌种首位。传统诊断依赖组织活检和影像学检查，存在创伤大、成本高、早期病变检出率低等瓶颈。循环肿瘤DNA（ctDNA）作为肿瘤释放至血液的基因碎片，因其无创、可动态监测的优势，在多种癌症中展现出诊断潜力。然而，巴基斯坦人群缺乏相关研究数据，且ctDNA在OSCC诊断中的特异性尚未明确。

研究方法与技术路线

开伯尔医学院联合多家机构开展病例对照研究，纳入94例初治OSCC患者（年龄56.82±11.92岁）和30名健康对照（31.93±7.10岁），所有样本经病理确诊并排除合并症干扰。核心技术包括：

1. 血浆ctDNA分离：10mL EDTA抗凝血经双离心（2,000g×10min→12,000g×10min）获取无细胞血浆，-80℃保存；
2. DNA提取与定量：采用Nucleospin XS试剂盒柱提法，经Qubit荧光计（高灵敏度）和NanoDrop分光光度计（纯度验证）双重定量；
3. 靶向检测：基于TaqMan探针的实时荧光定量PCR（QuantStudio5平台），引物参照文献设计，熔解曲线验证扩增特异性。

研究结果

人群特征与肿瘤分布

OSCC组平均年龄显著高于对照组（p<0.001），性别分布无差异。最常见原发部位为颊黏膜（20.16%），组织学以中分化（38.71%）和高分化（28.23%）为主（Fig.2）。

ctDNA水平差异

OSCC组ctDNA平均浓度（37.52±8.71 ng/mL）较对照组（11.00±6.39 ng/mL）升高2.4倍（p<0.001）（Fig.3）。线性回归模型证实：

• OSCC状态是ctDNA升高的最强预测因子（β=28.13, 95%CI:19.67-36.60, p<0.001）；
• 年龄、性别、肿瘤部位及分化程度均无显著影响（p>0.05）。

技术流程验证

样本处理全程控制在1小时内，避免DNA降解（Fig.1）。双平台定量确保结果可靠性，PCR扩增效率经熔解曲线优化。

结论与讨论

本研究首次证实巴基斯坦OSCC患者血浆ctDNA浓度显著高于健康人群，且该差异独立于肿瘤分化程度和临床特征，提示ctDNA可作为跨人群普适性标志物。其核心价值在于：

1. 诊断革新：单次抽血即可量化肿瘤负荷，突破组织取材限制；
2. 动态监测潜力：为术后残留病灶检测和复发预警提供技术基础；
3. 资源适配性：适用于医疗条件受限地区，推动早筛普及。

需关注的局限包括：队列年龄不匹配可能引入混杂、未分析特定基因突变、单中心样本代表性不足。未来需扩大样本量，探索ctDNA突变谱与疗效关联。

本成果发表于《BMC Oral Health》，为OSCC精准诊疗提供了首个巴基斯坦人群证据链，标志着液体活检技术向临床转化迈出关键一步。