四种表型检测方法评估耐多药肺炎克雷伯菌对多粘菌素敏感性的比较研究

本研究针对碳青霉烯耐药菌最后防线药物多粘菌素（colistin）的敏感性检测难题，通过比较CBDE（多粘菌素肉汤稀释法）、mCBDE（改良CBDE）、CAT（多粘菌素琼脂试验）和RPNP（快速多粘菌素显色法）四种方法与金标准BMD（肉汤微量稀释法）的检测效能，发现CBDE在116株耐多药肺炎克雷伯菌（MDR Klebsiella pneumoniae）中表现最优（CA达98.3%），为临床实验室提供了高效经济的替代方案。该成果发表于《BMC Microbiology》，对耐药菌防控具有重要实践意义。

　　

在全球抗生素耐药危机愈演愈烈的背景下，碳青霉烯类耐药革兰阴性菌的蔓延已成为公共卫生重大威胁。作为"最后防线"药物的多粘菌素（colistin），其敏感性检测却面临技术瓶颈——金标准肉汤微量稀释法（BMD）操作繁琐且耗时，而常规纸片扩散法因多粘菌素扩散性差而不可靠。这一问题在土耳其尤为突出，该国耐多药肺炎克雷伯菌（MDR Klebsiella pneumoniae）的碳青霉烯耐药率已从2017年的32.5%飙升至2021年的49.1%。面对这一严峻形势，来自土耳其健康科学大学古尔哈内培训与研究医院的Ilgaz Kazaz团队开展了一项创新研究，系统比较四种表型检测方法与BMD的效能，相关成果发表在《BMC Microbiology》期刊。

研究团队采用平行对照设计，对2022-2023年收集的116株MDR肺炎克雷伯菌（52.6%来自血培养，47.4%来自呼吸道样本）进行检测。关键技术包括：1）BMD法（浓度梯度0.25-16μg/mL）作为参考标准；2）CLSI推荐的CBDE法（1-4个10μg纸片梯度）和CAT法（1-4μg/mL琼脂梯度）；3）改良mCBDE法（单纸片2μg/mL阈值筛查）；4）Nordmann开发的RPNP显色法（3.75μg/mL浓度，4小时显色）。所有方法均采用同一菌悬液同步检测，严格遵循CLSI和ISO 20776-2:2021标准进行效能评估。

结果部分
BMD基准数据
参考方法测得MIC₅₀和MIC₉₀分别为2μg/mL和16μg/mL，50%分离株（58/116）表现为耐药。值得注意的是，7/12导致主要误差（ME）的菌株MIC值为1μg/mL（58.3%），3/12为2μg/mL（25%），2/12为0.25μg/mL（16.6%），提示临界值附近菌株易产生检测偏差。

方法比较结果
四种方法均未出现极重大误差（VME=0%）。CBDE表现最优：分类符合率（CA）98.3%，基本符合率（EA）99.13%，ME仅3.4%。改良mCBDE与RPNP灵敏度达100%，但ME较高（8.6%-10.3%）。CAT因24.7%的偏差率和12%的ME率表现相对欠佳。研究特别指出，

直观显示误差多集中于临界值附近（1-2μg/mL）。

结论与意义
该研究首次在土耳其验证了CLSI推荐的替代检测方案，证实CBDE在保持操作简便（仅需普通玻璃管和纸片）和低成本优势的同时，能达到与BMD高度一致的检测效能。这一发现对高耐药率地区尤为重要——在碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌检出率近50%的土耳其，快速准确的colistin药敏结果可直接指导临床用药决策。研究同时揭示的方法局限性（临界值附近误差）为后续改进指明方向，建议开展多中心研究纳入更多临界值菌株以优化检测流程。从更广视角看，这项工作为全球抗生素耐药防控提供了实用的实验室解决方案，其"经济高效"的技术路线特别适合资源有限地区推广应用。