探索新型接种方法诱导奶牛趾间皮炎实验模型的创新研究

本研究针对奶牛趾间皮炎(DD)这一病因未明的多微生物感染疾病，开发了基于纹身针的经皮接种技术，通过两项动物试验评估了病变匀浆物(LM)与纯菌株混合物(MP)的接种效果。虽然成功实现了Treponema spp.在表皮-真皮交界处的定植，但未能诱导典型DD病变，揭示了建立标准化感染模型需解决的关键因素，为后续研究提供了重要方法学参考。

　　

奶牛趾间皮炎(DD)是一种严重危害畜牧业的传染性蹄病，其病因复杂且缺乏标准化的实验模型。目前已知与多种螺旋体(Treponema spp.)和厌氧菌(Porphyromonas levii、Fusobacterium necrophorum等)相关，但现有动物模型存在诱导周期长、病变变异大等问题。加拿大卡尔加里大学的研究团队在《Research in Veterinary Science》发表论文，创新性地采用纹身针(TN)接种技术，系统评估了不同接种策略对DD模型建立的影响。

研究采用三项关键技术：1）通过尸体牛蹄预实验比较三种微针系统（实心微针SM、滚轮微针DR、纹身针TN）的皮肤渗透效率；2）两项动物试验分别测试单次LM接种（5头牛10蹄）与多次MP接种（含T. phagedenis等5种纯菌株，2头牛8蹄）的效果；3）运用qPCR定量检测7种DD相关菌种，结合组织学银染确认螺旋体存在。

【Pilot study】纹身针在墨水渗透深度（1.05±0.01μm）和覆盖面积（2.82%）上显著优于其他微针，被选为后续接种工具。
【Animal trial 1】单次LM接种后，虽在D7检测到T. phagedenis（3.5 log₁₀拷贝/拭子）等菌种，但14天内均未出现DD病变。
【Animal trial 2】采用3天水预处理+4次接种的强化方案，qPCR显示非Treponema厌氧菌可维持至D18，但活检仅12/20样本检出T. phagedenis（2.2 log₁₀拷贝/mg组织），银染证实螺旋体存在于表皮-真皮交界处。

讨论部分指出，失败原因可能涉及：1）接种体积控制不足，纹身针被动注入效率有限；2）纯菌株混合物缺乏病变微环境中的代谢互作；3）未模拟自然感染中的菌种定植时序。该研究首次证实纹身针可实现DD病原体的精准皮肤递送，为建立标准化模型提供了关键方法学突破。尽管未诱导典型病变，但揭示了宿主免疫调节、菌群互作等后续研究方向，对开发新型防控策略具有重要指导意义。