延龄草多糖分级组分的结构表征及其抗氧化与免疫调节活性研究

本研究针对延龄草(Trillium tschonoskii Maxim.)多糖(TTMPs)的构效关系不明问题，通过乙醇分级沉淀获得TTMP-40/50/60/70四个新组分，系统解析其理化特性与生物活性。研究发现TTMP-70具有最低分子量(10.7 kDa)和最高糖醛酸含量(14.13%)，展现出最强自由基清除能力(DPPH IC50 0.91 mg/mL)，并能通过降低CD8+ T细胞内ROS水平抑制H2O2诱导的凋亡、促进细胞增殖。该研究为开发天然抗氧化剂和免疫调节剂提供了新思路。

　　

在传统中医药宝库中，延龄草(Trillium tschonoskii Maxim.)作为珍稀药材素有"延龄草"美誉，其根茎被用于治疗炎症、疼痛等多种疾病。现代研究发现其富含多糖类成分，这类生物大分子因其低毒性和多重生物活性成为研究热点。然而，延龄草多糖的精细结构特征与生物活性间的构效关系尚不明确，特别是其对免疫细胞功能的影响机制亟待揭示。

湖北医药大学的研究团队在《Carbohydrate Polymer Technologies and Applications》发表的研究，通过超声辅助提取结合乙醇分级沉淀技术，从延龄草中分离出TTMP-40、TTMP-50、TTMP-60和TTMP-70四个多糖组分。研究采用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)分析分子量，离子色谱测定单糖组成，傅里叶变换红外光谱(FT-IR)和扫描电镜(SEM)表征结构特征，并通过DPPH/ABTS/羟基自由基清除实验评价体外抗氧化活性。在细胞实验中，采用磁珠分选获得小鼠CD8⁺ T细胞，通过流式细胞术检测ROS水平、细胞凋亡、线粒体膜电位(JC-10染色)和增殖标志物Ki-67。

3.1 多糖的理化性质
研究显示TTMP-70得率最高(4.87 g)，含50.19%总糖和14.13%糖醛酸。分子量分析发现TTMP-70含三个组分(595.95 kDa、105.38 kDa和10.75 kDa)，单糖组成以葡萄糖(62.3%)和半乳糖(15%)为主。FT-IR显示所有组分均具有多糖特征吸收峰(3365 cm^-1处-OH伸缩振动)，SEM显示TTMP-70呈不规则片状结构。

3.2 体外抗氧化活性
TTMP-70展现出最强的自由基清除能力：对DPPH(IC₅₀ 0.91 mg/mL)、ABTS(IC₅₀ 0.27 mg/mL)和羟基自由基(IC₅₀ 0.92 mg/mL)的清除率分别达89.84%、98%和67.39%。研究将其归因于其低分子量和较高糖醛酸含量。

3.2.2 对CD8⁺ T细胞的调控作用
在25 μg/mL浓度下，TTMP-70显著降低活化CD8⁺ T细胞内ROS水平。流式分析显示，TTMP-70预处理使H₂O₂诱导的凋亡率从33.99%降至20.48%，线粒体膜电位提升1.8倍，Ki-67阳性细胞比例显著增加，表明其能促进CD8⁺ T细胞增殖。

该研究首次系统阐明了延龄草多糖分级组分的结构-活性关系，证实TTMP-70通过调控氧化应激保护CD8⁺ T细胞功能的双重机制：既可作为自由基清除剂减轻氧化损伤，又能维持生理性ROS水平促进免疫细胞活化。这一发现为开发基于植物多糖的免疫调节剂提供了理论依据，也为延龄草资源的深度开发开辟了新途径。研究者特别指出，TTMP-70激活Nrf2/HO-1通路可能是其抗氧化作用的关键机制，这将成为后续研究的重点方向。