优化肺癌肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）制备工艺：缩短周期、降低成本并提升细胞毒性的GMP合规性研究

本研究针对非小细胞肺癌（NSCLC）治疗中肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）传统制备工艺复杂、成本高的问题，通过优化培养基配方（如T-cell特异性培养基替代RPMI）、激活方法（α-CD3/CD28纳米磁珠替代饲养细胞）及冻存方案，将培养周期从6-7周缩短至4周，最终获得平均200×109个记忆表型TILs，其肿瘤细胞杀伤效力优于传统Moffitt方案。该研究为TILs疗法的临床推广提供了标准化、低成本的生产路径。

　　

肺癌是全球癌症死亡的首要原因，其中非小细胞肺癌（NSCLC）占多数。尽管免疫检查点抑制剂如nivolumab带来希望，但患者响应率有限。过继性细胞治疗（Adoptive Cell Therapy, ACT）中的肿瘤浸润淋巴细胞（Tumor-Infiltrating Lymphocytes, TILs）疗法在黑色素瘤中成效显著，但在肺癌中推广面临挑战：传统TILs制备依赖Rosenberg方案，需6-7周培养、饲养细胞激活及开放操作，导致成本高、污染风险大。Moffitt癌症中心虽改进为封闭式G-Rex培养系统，但仍需进一步优化。

为解决上述问题，杜克大学医学院Marcus细胞治疗中心（MC3）的研究团队开展了一项GMP合规性研究，通过系统性优化培养基、激活方法和冻存工艺，显著提升TILs生产效率。研究发表于《Cytotherapy》，证实新方案（MC3法）在保持细胞产量和记忆表型（CD45RO⁺占比>80%）的同时，将培养周期缩短至4周，且细胞毒性优于传统Moffitt方案（MT法）。

关键技术方法
研究使用35例手术切除的肺癌样本，通过分半对照实验比较MC3法与MT法。关键改进包括：T-cell培养基替代RPMI、人AB血清替代血小板裂解物、α-CD3/CD₂₈纳米磁珠激活替代饲养细胞，并优化冻存液配方。细胞表型通过流式细胞术分析，毒性通过匹配肿瘤类器官杀伤实验评估。

研究结果
背景
传统TILs疗法在肺癌中临床响应率仅15.4%（2/13完全缓解），凸显工艺改进必要性。

方法
MC3法采用封闭式操作，减少开放步骤；纳米磁珠激活避免辐照饲养细胞的批次差异；冻存液含5% DMSO+40%人AB血清，复苏存活率>90%。

结果
MC3法TILs产量达200×10⁹/样本，与MT法相当，但CD8⁺效应记忆细胞比例提高20%；对类器官的杀伤活性增强1.5倍（p<0.05）。

讨论
MC3方案通过标准化试剂（如Gibco CTS^?培养基）和封闭式设备（如G-Rex^?）实现cGMP合规，单样本成本降低30%。

结论与意义
该研究首次证明α-CD3/CD₂₈纳米磁珠可完全替代饲养细胞，解决了传统工艺的供应链瓶颈。缩短的周期使TILs更适用于进展期肺癌的快速治疗窗口。未来需扩大临床试验验证长期疗效，但当前成果已为ACT在实体瘤中的普及奠定工艺基础。