猫源弓形虫卵囊感染特异性诊断方法的建立与LEA880蛋白的ELISA检测技术优化

本研究针对猫作为弓形虫终宿主在传播中的关键作用，开发了基于卵囊阶段特异性蛋白LEA880的间接ELISA检测技术。研究人员通过筛选弓形虫晚期胚胎发生丰富蛋白(LEA)家族，首次发现LEA880能特异性识别猫抗弓形虫卵囊血清，建立的方法具有高灵敏度和特异性，为区分猫弓形虫感染来源（卵囊/包囊）提供了突破性工具，对溯源防控人兽共患弓形虫病具有重要意义。

　　

弓形虫病作为重要的人兽共患病，其病原体弓形虫(Toxoplasma gondii, T. gondii)在全球约30%人群中潜伏感染。猫科动物作为唯一能排出具有环境抵抗力的卵囊的终宿主，在传播链中扮演关键角色。随着宠物猫数量激增，猫源弓形虫向人类传播的风险显著升高。然而现有诊断技术仅能判断感染与否，无法区分感染来源——这如同知道"罪犯"存在却找不到"犯罪现场"，极大阻碍了精准防控。

针对这一瓶颈，华中农业大学的研究团队在《Parasitology Research》发表创新性研究。他们从弓形虫卵囊阶段特异性表达的晚期胚胎发生丰富(Late Embryogenesis Abundant, LEA)蛋白家族入手，通过系统筛选发现LEA880蛋白能像"分子指纹"般特异性识别卵囊感染来源的猫血清。这种精准识别能力为破解弓形虫传播路径提供了关键工具。

研究采用四种关键技术：1) 从ME49株克隆表达LEA蛋白家族成员；2) 建立猫人工感染模型获得卵囊/包囊感染血清；3) 蛋白质印迹法筛选特异性抗原；4) 优化间接ELISA(iELISA)检测体系。临床样本检测显示，LEA880-iELISA与现有最佳诊断方法MIC17A-iELISA结果完全兼容，在117份猫血清中检出15例卵囊特异性感染。

筛选和原核表达LEA蛋白

通过弓形虫数据库TOXO.DB锁定四个卵囊阶段高表达的LEA蛋白(LEA850/860/870/880)，成功在大肠杆菌中表达纯化。

LEA880特异性识别猫抗弓形虫卵囊阳性血清

蛋白质印迹实验揭示只有LEA880能"精准捕捉"卵囊感染血清，与包囊感染血清和阴性血清均无交叉反应，如同专属的"分子探针"。

优化LEA880-iELISA流程

通过棋盘滴定确定最佳条件：8μg/mL包被浓度、1:100血清稀释度、0.5%BSA封闭，检测限达1:800稀释度，显著优于常规方法。

评估LEA880-iELISA应用价值

该方法与猫泛白细胞减少症病毒(FPV)等病原体血清无交叉反应，临床验证显示其能准确识别27.8%的卵囊感染病例，而72.2%感染源于包囊，这一发现为"阻断组织包囊传播"的防控策略提供了直接依据。

该研究首次实现猫弓形虫感染途径的精准区分，其创新性体现在：1) 发现LEA880作为卵囊感染特异性标志物；2) 建立首个区分感染来源的诊断方法；3) 揭示猫主要通过食入包囊感染的流行病学特征。这些突破不仅为评估环境卵囊污染风险提供工具，更指导养猫家庭采取针对性预防措施——彻底煮熟肉类、定期清理猫砂，从源头降低人兽共患风险。正如研究者指出，这项技术将帮助我们从"被动检测"迈向"主动防控"的新阶段。