综述：腺病毒导管内注射在乳腺中进行谱系追踪的方法

这篇综述系统评价了腺病毒(Ad)-Cre导管内注射技术在乳腺生物学研究中的应用价值。文章比较了该技术与传统他莫昔芬诱导CreER/loxP系统的优劣，重点阐述了Ad-Cre在乳腺上皮细胞(MEC)命运图谱绘制、乳腺癌细胞起源鉴定和肿瘤模型构建中的独特优势，同时探讨了其免疫微环境影响及与CRISPR条形码技术的整合前景。

　　

引言

脉冲追踪谱系技术通过特定时间窗标记细胞群体并追踪其后代命运，已成为发育生物学和癌症研究的核心工具。在高度动态的乳腺组织中，该技术为解析复杂的细胞层级关系提供了关键手段。传统他莫昔芬诱导的CreER/loxP系统虽广泛应用，但存在雌激素信号干扰、乳腺特异性低等局限。相比之下，腺病毒(Ad)-Cre导管内注射技术通过瞬时表达Cre重组酶，实现了快速、器官特异性的遗传标记。

腺病毒编码蛋白的体内动力学

腺病毒作为非整合型DNA病毒，其携带的转基因表达呈现典型瞬时特征。研究表明，CMV启动子驱动的GFP表达在注射后2天达峰，2周内近乎消失。这种短暂表达窗口（约2周）使其特别适合脉冲追踪实验。值得注意的是，使用乳腺特异性启动子（如Krt8、Krt5）时，Cre表达水平更低，可能进一步缩短有效标记期。

靶向不同MEC亚群的Ad-Cre导管内注射

通过替换病毒载体启动子，研究者开发了系列MEC亚群特异性Ad-Cre工具：

• Ad-K8-Cre：特异性标记管腔细胞
• Ad-K5-Cre：精准靶向基底细胞
• Ad-Wap-Cre：针对肺泡管腔细胞和管腔祖细胞(LP)
  
  

应用进展

命运图谱绘制：
Ad-K8-Cre与Ad-K5-Cre证实管腔和基底谱系主要自我维持。Ad-Wap-Cre标记显示，LP在妊娠期分化为产奶的肺泡细胞，并在卵巢切除后长期维持，揭示其激素非依赖性自我更新能力。

肿瘤模型构建：

• Etv6-NTRK3融合基因模型中，Ad-K8-Cre诱导产生异质性肿瘤，而Ad-Wap-Cre仅引发基底转分化型肿瘤
• Pik3ca^H1047R模型证实该突变可诱导基底-管腔谱系转换
• Trp53缺失导致Claudin-low型肿瘤，而Brca1/Trp53共缺失则产生基底样肿瘤

免疫微环境影响：
腺病毒注射会引发CD8⁺ T细胞持续浸润，这种"基线"免疫改变虽不影响肿瘤潜伏期，但需谨慎解读免疫相关数据。

技术比较

与传统CreER系统相比，Ad-Cre具有三大优势：

1. 避免他莫昔芬的雌激素干扰
2. 器官特异性更高
3. 无需繁育转基因小鼠

未来方向

结合CRISPR/Cas9的"数字"条形码技术，可在Rosa26-loxP-Stopper-loxP-Cas9-EGFP模型中实现：

• 传统荧光标记（模拟条形码）
• CRISPR诱导突变（数字条形码）
  
  

这种多组学方法将有助于解决成年乳腺干细胞(MaSC)多能性争议，推动乳腺发育和肿瘤异质性研究进入单细胞精度时代。