外源性腺苷逆转携带tet(X3)基因大肠杆菌对替加环素的耐药性：代谢重编程策略与机制研究

本研究通过非靶向代谢组学技术，发现腺苷(Ado)可作为逆转tet(X3)介导的替加环素(TGC)耐药的关键代谢物。实验证实Ado通过诱导氧化应激(ROS)、破坏DNA/RNA和细胞膜，显著增强TGC对耐药菌的杀灭效果，并在体内外模型中验证了其协同作用。该研究为应对"最后防线"抗生素耐药危机提供了创新的代谢干预策略。

　　

代谢重编程揭示耐药逆转新机制
通过超高效液相色谱-轨道阱质谱(UHPLC-QE-Orbitrap-MS)技术，研究团队系统分析了tet(X3)阳性大肠杆菌的代谢特征。在72种差异代谢物中，35种上调物质如泛酸、ADP和葡萄糖显示碳水化合物代谢增强，37种下调物质如NAD和琥珀酸则反映氨基酸代谢抑制。京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析揭示，这些变化集中于辅酶A合成、嘌呤代谢和三羧酸循环(TCA)等12条关键通路。

腺苷展现协同杀菌潜力
在棋盘法实验中，1.56-6.25 mM腺苷使替加环素对工程菌E. coli DH5α(pUC19/tet(X3))的最小抑菌浓度(MIC)降低50%，FIC指数<0.3124。对天然耐药株E. coli ZY726，该组合使8小时存活率从单药的5.81%骤降至0.06%。类似协同效应也见于四环素(TET)，128 μg/mL TET联用Ado后，细菌存活率从11.33%降至0.0135%。

氧化应激驱动杀菌效应
DCFH-DA荧光检测显示，TGC+Ado处理使耐药菌内活性氧(ROS)水平提升132%，显著高于单药组。添加抗氧化剂α-硫辛酸(ALA)后，细菌存活率回升至21.18%，证实ROS积累是关键杀菌机制。ELISA检测发现该组合使氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)和8-羟基鸟苷(8-OHG)含量分别增加3.2倍和2.8倍。

形态学与体内验证
扫描电镜(SEM)观察到联合处理组细菌出现细胞壁塌陷和胞质泄漏。小鼠感染模型显示，Ado(70 mg/kg)与TGC(10 mg/kg)联用使肝脏细菌载量降低2个数量级，生存率从0%提升至66.7%。组织病理学显示，联合治疗组肝脏脂肪变性和脾脏淋巴细胞坏死显著减轻。

该研究首次阐明腺苷通过代谢重编程逆转tet(X3)介导耐药的分子机制，为应对"超级细菌"威胁提供了新型佐剂开发思路。通过靶向细菌能量代谢和氧化应激通路，这种策略有望延展现有抗生素的临床使用寿命。