靶向血脑屏障穿透性抗体开发：中和蜱传脑炎病毒（TBEV）的中枢神经感染治疗新策略

这篇研究开创性地开发了融合狂犬病毒糖蛋白（RVG）肽段的抗蜱传脑炎病毒（TBEV）重组抗体，通过受体介导的转胞吞作用（RMT）突破血脑屏障（BBB），首次实现外周给药后有效中和脑内TBEV。研究证实RVG融合不影响抗体中和活性，并在体外BBB模型和小鼠体内实验中验证其穿透性与治疗潜力，为神经侵袭性病毒感染提供了突破性治疗策略。

　　

摘要

蜱传脑炎病毒（TBEV）是一种嗜神经性病原体，可引发严重神经系统疾病，目前缺乏特异性治疗手段。研究团队通过将抗TBEV抗体与狂犬病毒糖蛋白（RVG）肽段融合，开发出能穿透血脑屏障（BBB）的重组抗体。RVG通过结合烟碱型乙酰胆碱受体（nAChR）触发受体介导转胞吞作用（RMT），使抗体跨越BBB。实验显示，RVG融合对抗体中和能力无显著影响，且在体外BBB模型中人脑微血管内皮细胞（hCMEC/D3）的穿透率提升。小鼠模型中，外周注射的RVG融合抗体在脑内积累量显著高于非融合抗体，并在病毒侵入脑组织后仍能有效降低脑内病毒载量。

材料与方法

研究采用两种抗TBEV单克隆抗体：鼠源19/1786（IgG1）和人源T025。通过基因工程构建全抗体和单链可变区片段（scFv），并在重链C端融合RVG肽段（序列：YTIWMPENPRPGTPCDIFTNSRGKRASNG）。抗体在Expi293F细胞中表达，通过蛋白印迹验证分泌。中和实验使用TBEV Oshima 5-10株，通过空斑减少中和试验（PRNT）测定半数抑制浓度（IC₅₀）。

体外BBB模型采用hCMEC/D3细胞，通过跨内皮电阻（TEER）评估屏障完整性。抗体穿透性通过ELISA定量，病毒中和效果通过空斑试验检测。小鼠实验中，生物素标记抗体腹腔注射24小时后检测脑内积累量；治疗实验则在病毒感染后第4-6天给药，第7天测定脑内病毒滴度。

结果

1. 抗体设计与功能验证：RVG融合的全抗体和scFv均成功表达（图1B）。PRNT显示RVG融合的19/1786和T025全抗体IC₅₀分别为1.2 nM和1.6 nM，与非融合抗体相当（图1C）。
2. BBB穿透机制：免疫荧光证实RVG融合抗体特异性结合hCMEC/D3细胞表面（图2），体外模型穿透率提升3-5倍（图3B）。
3. 体内治疗潜力：RVG融合抗体在小鼠脑内的积累量（%ID/g）显著高于对照组（图4A），且治疗后脑内病毒滴度降低10²-10³ PFU/mL（图4B）。

讨论

研究首次证明RVG融合抗体可突破BBB限制，为TBEV脑内感染提供治疗窗口。RVG通过nAChR介导的RMT途径实现靶向递送，其效率与既往报道的Angiopep-2等配体相当。值得注意的是，人源T025抗体在小鼠模型中表现出更优的脑靶向性，提示临床转化潜力。未来可探索与靶向细胞内病毒的小分子（如siRNA）联用，形成协同治疗方案。

重要性

该研究为神经侵袭性病毒感染的抗体疗法树立了新范式，其BBB穿透技术还可拓展至阿尔茨海默病等中枢神经系统疾病治疗领域。