p63与ZNF148协同调控头颈鳞状细胞癌的分子机制及临床意义

本研究揭示了转录因子p63与锌指蛋白ZNF148在头颈鳞状细胞癌（HNSCC）中的协同作用机制。通过蛋白质组学分析发现，p63/ZNF148复合物通过结合CCND1基因上游增强子区域并转录增强子RNA（eRNA3），驱动细胞周期蛋白D1（cyclin D1）过表达，促进肿瘤增殖。该轴在晚期HNSCC中显著激活，与淋巴结转移和不良预后相关，为靶向治疗提供了新策略。

　　

ZNF148是p63的共作用因子
通过邻近标记技术（BioID）结合质谱分析，研究团队在HNSCC中鉴定出89个p63邻近相互作用蛋白，其中锌指蛋白ZNF148与p63的共表达和物理结合最为显著。免疫共沉淀（Co-IP）和邻近连接实验（PLA）证实，两者通过p63的C端与ZNF148的N端直接结合，并在正常表皮和肿瘤组织中共定位。

p63与ZNF148共享染色质结合区域
染色质免疫沉淀测序（ChIP-seq）显示，p63和ZNF148在FaDu细胞中共同占据5,188个基因组位点，其中11号染色体上的CCND1基因座尤为突出。通路分析揭示这些共结合区域富集于癌症相关通路，尤其是调控细胞周期的基因。敲低p63或ZNF148显著降低CCND1表达，提示二者协同调控肿瘤增殖。

p63/ZNF148通过eRNA3激活CCND1转录
在CCND1上游400 kb区域内，p63/ZNF148复合物特异性结合增强子区域Peak3，并转录产生功能性eRNA3。机制上，该复合物招募DNA甲基转移酶DNMT3A，通过表观遗传修饰激活eRNA3，进而促进CCND1表达。CRISPR/Cas9删除Peak3区域或敲低eRNA3均显著抑制cyclin D1水平，证实其调控依赖性。

p63/ZNF148轴驱动HNSCC细胞增殖
功能实验表明，沉默p63或ZNF148可降低cyclin D1、磷酸化pRB（ppRB）水平，抑制FaDu和A253细胞的克隆形成、EdU掺入及体内成瘤能力。值得注意的是，这一调控轴在正常角质细胞（HEKn）中无活性，凸显其癌症特异性。

临床关联与治疗潜力
对48例喉鳞癌（LSCC）样本的分析显示，p63、ZNF148、eRNA3和CCND1在III-IV期及淋巴结转移（LN+）肿瘤中表达显著升高，且呈强正相关。组织微阵列（TMA）进一步验证了蛋白水平的协同表达模式。生存分析提示高ZNF148水平与患者不良预后相关。

讨论与展望
该研究首次阐明ZNF148作为p63共因子通过eRNA3表观调控CCND1的致癌机制，为HNSCC的分子分型和靶向治疗提供了新思路。未来可探索干扰p63/ZNF148相互作用或靶向eRNA3的小分子策略，以克服晚期HNSCC的治疗瓶颈。