人血浆中双靶向1,5-二芳基-1,2,4-三唑磺酰胺类化合物(WA11–13)的LC–MS/MS同步定量分析方法开发与验证

研究人员开发了一种高灵敏度LC–MS/MS检测方法，用于同步定量人血浆中新型双靶向抗癌化合物WA11–13。该方法通过优化色谱条件（Phenomenex Kinetex C18柱，0.1%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱）和质谱参数（API 3500三重四极杆，正离子模式MRM检测），实现了WA11(2.5–750 ng/mL)、WA12(25–1000 ng/mL)和WA13(50–1000 ng/mL)的精准定量。经验证符合FDA指南，为这类碳酐酶(CA)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)双靶点抑制剂的临床前研究和治疗药物监测提供了关键技术支撑。

　　

科研团队近期设计合成了一系列具有双重靶向作用的抗癌化合物——1,5-二芳基-1,2,4-三唑磺酰胺类衍生物。其中WA11–13表现出优异的碳酐酶(Carbonic Anhydrase, CA)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)抑制活性。为推进这些候选药物的开发，研究者建立了灵敏可靠的液相色谱-串联质谱(LC–MS/MS)检测方法。

该方法采用乙腈蛋白沉淀前处理，在Phenomenex Kinetex C₁₈色谱柱(2.6 μm, 100×3.0 mm)上实现快速分离，以0.7 mL/min流速进行梯度洗脱(0.1%甲酸水溶液-乙腈)。质谱检测使用API 3500三重四极杆系统，采用电喷雾电离正离子模式(ESI⁺)和多反应监测(MRM)技术，确保检测的高选择性和灵敏度。

方法学验证显示，WA11、WA12和WA13分别在2.5–750 ng/mL、25–1000 ng/mL和50–1000 ng/mL范围内呈现良好线性(r²>0.99)。所有验证指标(精密度、准确度、稳定性等)均符合FDA生物分析方法验证指南要求。该方法的成功建立为这类双靶点抗癌化合物的药代动力学研究和临床治疗药物监测(Therapeutic Drug Monitoring, TDM)提供了关键技术手段。