单分子分辨率全景图谱：Nano3P-seq解码编码与非编码RNA多聚腺苷酸化动态

为解决RNA多聚腺苷酸化（poly(A)）动态在转录组层面的精准解析难题，研究人员开发了Nano3P-seq技术及配套软件PolyTailor。该方案基于纳米孔测序，通过模板转换机制捕获RNA 3'端，无需PCR扩增或连接适配体，可在单分子水平同时定量RNA丰度、poly(A)尾长度及组成（如非A核苷酸占比）。其兼容R10.4芯片，支持poly(A)富集、核糖体RNA去除或总RNA样本，1日内完成实验。研究证实其对mRNA、snoRNA、rRNA等编码/非编码RNA的poly(A)尾分析具有高精度，为转录组调控机制研究提供全新工具。

　　

专业翻译

RNA多聚腺苷酸化（polyadenylation）是调控RNA成熟、稳定性及功能的核心机制，其尾部长度深刻影响mRNA翻译效率与降解速率。本研究详述了纳米孔3'端捕获测序（Nano3P-seq）的操作流程——一种基于纳米孔cDNA测序的技术，可在单分子分辨率下同步获取RNA丰度、尾部组成（如尿苷化修饰）及长度信息。该技术利用模板转换（template switching）机制，无需PCR扩增或RNA接头连接，即可直接捕获任意RNA分子的3'端序列（无论是否含poly(A)尾）。

升级版Nano3P-seq兼容R10.4流式细胞芯片，并配套自主开发的多聚腺苷酸尾分析软件PolyTailor。验证表明，PolyTailor可精准量化转录本表达水平及尾部特征（长度与核苷酸组成），成功应用于mRNA、小核仁RNA（snoRNA）及核糖体RNA（rRNA）等多类编码/非编码RNA的解析。

技术优势包括：

1. 样本普适性：支持poly(A)富集、核糖体RNA去除（ribodepleted）或总RNA样本；
2. 高效流程：实验可在24小时内完成；
3. 无偏捕获：摆脱传统方法对poly(A)尾的依赖，全面覆盖修饰型RNA分子。

该方案需使用者具备分子生物学实验、纳米孔建库及Linux Bash/R语言基础，为系统性研究编码与非编码转录组尾部异质性及动态调控提供了标准化、可重复的分析平台。