揭示细胞因子动态：急性中耳炎分阶段免疫反应的关键作用

为解决急性中耳炎(AOM)中细胞因子表达谱不明的问题，研究人员开展对非典型流感嗜血杆菌(NTHi)诱导AOM小鼠模型的细胞因子动态研究。通过整合PCR Array、Protein Array和Luminex多路检测技术，鉴定出20种细胞因子并分三类（早期、进展期、末期），揭示其在免疫阶段中的特异性作用，为靶向治疗提供理论依据。

　　

急性中耳炎（Acute Otitis Media, AOM）是学龄前儿童高发的感染性疾病，全球范围内影响深远。若不及时治疗，可能导致慢性中耳炎、听力损伤甚至颅内感染等严重并发症。AOM的发病机制与宿主免疫反应紧密相关，尤其是中耳上皮细胞的激活。当病原体入侵时，模式识别受体（Pattern Recognition Receptors, PRRs）识别微生物成分，触发炎症信号通路，促使细胞因子分泌以招募免疫细胞清除病原。然而，细胞因子的表达动态在AOM中仍不明确，其短暂性和个体差异性导致临床研究受限，阻碍了精准治疗策略的开发。随着肺炎球菌疫苗的普及，非典型流感嗜血杆菌（Nontypeable Haemophilus influenzae, NTHi）已成为AOM的主要病原体，但其诱导的细胞因子时空变化尚未系统解析。

针对这一挑战，滨州医学院的研究人员开展了一项创新研究，通过构建NTHi诱导的AOM小鼠模型，结合多组学技术全面描绘细胞因子动态。研究发现细胞因子在AOM不同阶段（早期、进展期、末期）发挥特异性作用，并识别出关键互作网络。这些成果发表于《Microbial Pathogenesis》，为分阶段靶向治疗奠定了理论基础。

研究人员采用NTHi标准菌株（ATCC49766）通过鼓膜注射诱导C57BL/6J小鼠AOM模型，细菌悬液浓度为1×10¹⁰ CFU/ml。关键技术包括：PCR Array和Protein Array分别分析感染后6小时(h)和12 h的细胞因子mRNA和蛋白差异；qPCR追踪mRNA表达于6 h、12 h、1天(d)、2 d、3 d和7 d等时间点；Luminex多路检测技术量化蛋白水平于12 h、1 d、2 d和5 d。样本源自小鼠中耳组织，确保动态覆盖炎症全程。

背景
AOM高发于学龄前儿童，病因涉及宿主免疫未成熟、遗传易感性及环境因素（如上呼吸道感染）。免疫反应失调可导致炎症持续和组织损伤，细胞因子作为关键介导者（如白细胞介素Interleukins、趋化因子Chemokines），在AOM亚型中表达各异，但临床检测范围有限且易受瞬变影响。

目的
本研究旨在识别AOM免疫相关的细胞因子，并阐明其在疾病不同阶段的功能角色。

方法
通过NTHi注射构建小鼠AOM模型，中耳组织采样后，应用PCR Array、Protein Array、qPCR和Luminex技术多时间点分析细胞因子表达，以推断其在免疫过程中的作用。

结果
PCR Array在6 h鉴定13种mRNA差异显著的细胞因子；Protein Array在12 h发现9种差异表达蛋白；qPCR追踪出20种细胞因子，Luminex检测31种细胞因子（10种重叠）。根据表达趋势，细胞因子分三类：早期（13种，如CCL2、CXCL1）、进展期（20种）和末期（4种）。

结论
细胞因子在AOM各阶段（早期招募免疫细胞、进展期调控炎症、末期促进修复）发挥独特且关键作用，同阶段高表达细胞因子间存