抗IgD纳米抗体：解析人类IgD生物学的新型分子工具

本研究针对人类免疫球蛋白D(IgD)研究工具匮乏的现状，开发了四种靶向IgD-Fc区的纳米抗体(Nbs)。通过表面等离子共振(SPR)和尺寸排阻色谱(SEC)证实这些Nb具有纳摩尔级亲和力，其中aδNb408成功应用于IgD纯化，而aδNb408-aδNb107双特异性组合显著增强了对Namalwa B细胞的检测灵敏度。该研究为IgD功能研究和诊断应用提供了模块化工具集。

　　

免疫系统中最神秘的抗体——免疫球蛋白D(IgD)长期缺乏有效研究工具。作为五类抗体中唯一未发现特异性Fc受体的成员，IgD在B细胞耐受和黏膜免疫中的作用始终成谜。传统IgD纯化方法依赖非特异性凝集素，而商业抗体又难以满足基础研究需求。这种技术瓶颈严重阻碍了学界对IgD在感染、过敏和自身免疫疾病中作用的认知。

英国伦敦国王学院Randall细胞与分子生物物理中心的研究团队在《Scientific Reports》发表突破性成果。研究人员从羊驼免疫文库中筛选出四种靶向人IgD-Fc区的纳米抗体，通过结构生物学和生物物理技术解析其结合特性，并开发出多功能应用体系。该研究首次实现IgD的特异性高效纯化，同时创建了适用于SPR检测和流式分析的标准化工具。

关键技术包括：1)动物免疫与噬菌体展示筛选获得特异性Nb；2)表面等离子共振动力学分析；3)尺寸排阻色谱测定结合化学计量比；4)DoubleCatcher平台构建双特异性Nb对；5)动态光散射分析复合物组装状态。实验使用Namalwa B细胞系验证膜结合型IgD检测效率。

表征四种抗IgD Nbs
SEC显示aδNb107/367/408以2:1化学计量比结合IgD-Fc二聚体，而aδNb571呈1:1结合。SPR测得亲和力在0.6-22 nM范围，其中aδNb408对Cδ2域具有特异性。表位分组实验证实四种Nb识别不同表位，且存在潜在变构效应。

aδNb408作为纯化工具

pH 3.5洗脱条件下，该Nb能从含1% BSA的缓冲液或10%胎牛血清的培养上清中高效回收IgD，树脂可重复使用12个月。SEC谱图显示纯化产物主要为IgD单体，仅含微量杂质。

SPR捕获工具开发

生物素化aδNb107和aδNb408能稳定捕获IgD，用于分析抗原(Ole e 3)或其它Nb的结合特性。这种定向固定策略克服了IgD直接偶联芯片易失活的缺陷。

双特异性Nb增强检测

aδNb408-aδNb107组合使Namalwa细胞检测信号增强5倍，DLS证实其通过分子内结合提高亲和力。相较之下，同源二聚体aδNb408-aδNb408会引发IgD-Fc交联，形成超大复合物。

该研究突破性地解决了IgD研究领域三大难题：1)开发首个不依赖糖基化或抗原特异性的通用纯化方案；2)建立膜型和分泌型IgD的标准化检测体系；3)揭示IgD-Fc可能存在变构调控现象。这些模块化工具不仅推动IgD生物学机制研究，更为相关疾病诊断和治疗策略开发奠定基础。特别值得注意的是，双特异性Nb技术为B细胞受体信号转导研究提供了新思路，而pH敏感性aδNb408在临床样本处理中展现出独特优势。未来通过解析Nb-IgD复合物晶体结构，有望揭示IgD与其它免疫球蛋白的功能进化差异。