益生菌株Streptococcus salivarius eK12的基因组草图解析：基于质粒pRSSL1改造增强抗化脓链球菌活性的研究

来自国际团队的研究人员针对化脓链球菌(GAS)感染防治需求，通过基因工程改造益生菌株Streptococcus salivarius K12的质粒pRSSL1，构建出强化型菌株eK12。该研究通过启动子替换(PtufA)提升salivabactin产量并干扰GAS群体感应通路，基因组测序证实仅存在预期修饰且无抗生素耐药基因，为开发靶向性益生菌疗法提供新策略。

　　

这项研究公布了益生菌株Streptococcus salivarius eK12的基因组草图，该菌株是通过改造母本K12（ATCC BAA-1024）的质粒pRSSL1获得的工程化衍生株。研究团队采用分子剪刀技术：首先用引物pJL nip A/B扩增目标基因侧翼600 bp片段，克隆至pJL1055载体后通过ComS肽介导的转化系统导入宿主；随后引入终止密码子突变(nip*)并采用组成型启动子PtufA替换sar生物合成基因簇(BGC)的天然启动子，显著提升了铁载体salivabactin的产量。

Illumina NovaSeq X Plus测序产生331 Mb高质量数据(Q30)，经SPAdes组装获得34条contig（N50 273 kb），CheckM评估显示99.39%基因组完整性。比较基因组分析证实，eK12与原始K12（参考基因组PRJNA168659）的唯一差异正是设计的质粒修饰——包含235 bp PtufA插入序列和nip基因失活。通过CARD数据库筛查未检出获得性耐药基因(AMR)，CLSI标准药敏试验显示所有MIC值均低于EFSA安全阈值（如红霉素0.12 μg/mL＜2 μg/mL）。值得注意的是，Platon软件在质粒contig上检测到前病毒基因，但VirSorter2分析表明其无活性风险。

功能验证显示，改造后的eK12通过双重机制抑制GAS：增强的铁载体竞争结合能力联合干扰病原体的群体感应系统。该研究为开发精准调控口腔菌群的"活体药物"提供了关键技术路线和安全性评估范式。