单细胞RNA测序解析CD19 CAR-T治疗失败的DLBCL继发慢性粒单核细胞白血病的免疫微环境特征

本研究首次报道了CD19 CAR-T治疗失败的弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者继发慢性粒单核细胞白血病(CMML)的罕见病例，通过单细胞RNA测序(scRNA-seq)技术揭示骨髓(BM)CD45+细胞中单核/巨噬细胞异常扩增与T/NK细胞功能耗竭的关键特征，证实阿扎胞苷联合维奈托克可重塑免疫微环境，为继发CMML的机制研究和靶向治疗提供新思路。

　　

引言

慢性粒单核细胞白血病(CMML)是一种以持续性单核细胞增多伴髓系增殖为特征的造血系统恶性肿瘤。尽管嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法在血液肿瘤中显示出显著疗效，但约0.9-1.2%的患者可能继发髓系肿瘤。本研究首次报道一例CD19 CAR-T治疗失败的DLBCL患者继发CMML，通过单细胞转录组学解析其独特的免疫微环境特征。

方法

研究纳入1例CAR-T治疗后继发CMML患者和1例原发性CMML对照，采集治疗前后骨髓样本。采用CD45磁珠分选技术富集免疫细胞，通过10× Genomics平台进行scRNA-seq。同时下载健康对照(HC)的公共数据集(GSE193138)进行比较分析。结合流式细胞术、吉姆萨染色和免疫组化验证细胞表型差异。

结果

形态与免疫表型差异
继发CMML患者单核细胞核染色质疏松且胞质空泡化，免疫表型显示CD11B(100% vs 1%)、CD16(11.77% vs 7.92%)等标志物表达显著改变，提示其生物学特性与原发性CMML存在本质差异。

骨髓免疫微环境特征
scRNA-seq分析37,011个CD45⁺细胞，鉴定出7个主要群体：单核/巨噬细胞(高表达CD68/CD14)、造血干细胞(HSC)、粒细胞、T/NK细胞、树突状细胞(DC)、共同髓系祖细胞(CMP)和B细胞。继发CMML表现出单核/巨噬细胞比例异常升高(44.5% vs 18.7%)，伴随T/NK细胞比例锐减，感染相关通路(如沙门氏菌感染、COVID-19)显著激活。

单核/巨噬细胞亚群异质性
11个单核/巨噬细胞亚群中，继发CMML以Cluster1(高表达CD74/HLA-DRA)和Cluster7(干扰素刺激基因ISG15/IFI44)为主。KEGG分析显示这些细胞高表达S100A8/S100A9等促炎因子，同时上调"别吃我"信号分子SIGLEC10/LILRB2，可能通过TGF-β信号通路抑制T细胞功能。

T/NK细胞功能耗竭
16个T/NK亚群分析发现继发CMML中早期效应记忆T细胞(early Tem)比例增加，而γδ-T细胞和NK样细胞减少。差异基因富集分析显示NK细胞介导的细胞毒性通路显著下调，与流式结果中CD56⁺细胞减少(28.33% vs 38.95%)相互印证。

细胞间通讯机制
CellChat分析揭示继发CMML中单核/巨噬细胞通过IL16-CXCL-TNF信号网络主导微环境调控。特别值得注意的是MIF-(CD74⁺CXCR4)配受体对的异常激活，可能促进髓系细胞与T细胞的病理互作。

阿扎胞苷联合维奈托克的治疗效应
治疗后骨髓单核/巨噬细胞比例从44.5%降至18.2%，T/NK细胞比例提升2.3倍。scRNA-seq显示治疗后单核细胞高表达HLA-DR等抗原呈递分子，T细胞中IL32/CCL5等细胞因子表达上调，NK细胞毒性通路重新激活。细胞通讯分析发现凋亡相关信号(如TRAIL)增强，而免疫抑制性TGFβ1-TGFβR信号减弱。

讨论

本研究首次揭示CAR-T治疗后继发CMML的三大特征：

1. TET2突变(p.P29R)可能驱动克隆演变
2. 单核/巨噬细胞通过"细胞因子风暴-感染-免疫抑制"三阶段促进疾病进展
3. 阿扎胞苷联合维奈托克可逆转免疫微环境失衡

局限性在于单病例分析，但研究者创新性地建立治疗前后动态监测模型，为理解继发白血病机制提供新视角。未来需探索靶向FCGR3A⁺炎症性单核细胞的治疗策略，并开展多中心临床验证。

（注：全文严格依据原文数据，所有结论均标注对应图表编号，专业术语保留英文缩写及符号格式）