靶向WEE1与asciminib联合治疗：克服ABL酪氨酸激酶抑制剂耐药性慢性髓系白血病的新策略

本研究针对慢性髓系白血病(CML)患者对ABL酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)耐药的关键临床难题，通过筛选ponatinib耐药细胞系，发现WEE1抑制剂MK-1775与新型STAMP抑制剂asciminib的协同作用。研究证实联合治疗可显著抑制细胞增殖、诱导G2/M期阻滞和线粒体膜电位(MMP)破坏，为克服T315I突变等耐药机制提供新方案，发表于《Discover Oncology》具有重要转化价值。

　　

慢性髓系白血病(CML)作为由BCR::ABL1融合基因驱动的血液恶性肿瘤，虽经酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)治疗取得显著进展，但约15-20%患者因T315I等突变产生耐药性，导致治疗失败。这一"耐药困局"促使科学家不断探索新型靶向策略。东京医科大学血液病学科（Tokyo Medical University, Department of Hematology）的Seiichi Okabe团队在《Discover Oncology》发表的研究，揭示了WEE1激酶抑制剂与新型变构抑制剂asciminib的协同效应，为破解耐药难题提供了创新解决方案。

研究团队采用多组学联合作战策略：首先通过GSE100026/GSE47927数据库分析发现CML患者中WEE1/PKMYT1表达显著上调；随后建立ponatinib耐药细胞株(K562-PR)进行1900种化合物筛选，锁定WEE1抑制剂MK-1775；结合CellTiter-Glo^?活力检测、LDH细胞毒性实验、克隆形成实验等技术，系统评估单药及联合用药效果；最后通过流式细胞术检测细胞周期分布（BD Cycletest^TM Plus试剂盒）和JC-1线粒体膜电位探针揭示作用机制。

3.1 WEE1激酶抑制剂是PR CML细胞的候选药物
基因组数据分析显示，CML慢性期患者造血干细胞中WEE1/PKMYT1表达较健康组上调2.1倍（p<0.001），而WEE2表达下降。MK-1775对K562-PR细胞的IC₅₀为328 nM，对T315I突变型Ba/F3细胞同样有效，提示其广谱抗耐药特性。

3.2 MK-1775在CML细胞中的活性
500 nM MK-1775处理48小时可使K562细胞LDH释放率提升至63%（p<0.0001），并剂量依赖性激活caspase 3/7（最高达4.7倍）。免疫印迹显示γH2AX（DNA双链断裂标志物）和p21蛋白表达显著增加，证实其通过DNA损伤和周期阻滞发挥作用。

3.3 Asciminib活性及其与MK-1775联用效果
20 nM asciminib（相当于临床80 mg QD的谷浓度）与500 nM MK-1775联用，使K562-PR细胞活力降至单药的41%（p<0.0001）。值得注意的是，这种协同效应在T315I突变细胞中更为显著，存活率仅余28%。

3.4 通过集落形成实验分析抗癌效果
联合治疗使K562细胞集落数减少87%（p<0.0001），且形成的集落直径缩小约60%，表明其可有效抑制肿瘤干细胞自我更新能力。

3.5 Asciminib和MK-1775在CML细胞中的功效
流式分析揭示联合治疗使sub-G₁期细胞比例增加至41.2%（单药仅15-18%），JC-1单体/聚体比值升高3.3倍（p<0.001），证实其通过线粒体凋亡途径发挥作用。

这项研究开创性地证明：靶向WEE1激酶可破坏CML细胞的"基因组守护者"功能，而asciminib通过变构抑制阻断BCR::ABL1信号，双剑合璧产生显著协同效应。特别在耐药突变型细胞中，联合方案使caspase 3/7活性提升至单药的2.8倍，为临床克服TKI耐药提供了明确路径。未来需在PDX模型和临床试验中验证该方案的安全性及最佳给药策略，但其已展现出作为CML二线治疗的巨大潜力，尤其对于携带T315I等"无药可治"突变的患者群体具有突破性意义。