人Aichi病毒假病毒系统的构建及其在细胞与动物模型中的感染特性分析

为解决Aichi病毒(AiV)难以分离培养且缺乏研究工具的问题，南方医科大学团队成功构建了含双报告基因的AiV假病毒系统(AiV PsV)。通过优化三质粒共转染体系，筛选出HeLa细胞为最敏感靶细胞，并建立BALB/c小鼠腹腔感染模型，首次实现AiV体内分布的可视化追踪。该研究为AiV致病机制研究及疫苗开发提供了关键技术平台。

　　

人Aichi病毒(AiV)自1989年在日本急性胃肠炎患者粪便中发现以来，已被证实与全球范围内儿童腹泻暴发密切相关。这种属于小RNA病毒科(Picornaviridae)的病原体存在A、B、C三种基因型，血清学调查显示40岁以上人群抗体阳性率高达85-90%。然而，由于AiV难以体外分离培养，其细胞入侵机制和动物感染模型长期缺失，严重阻碍了疫苗研发进程。

南方医科大学公共卫生学院的研究团队在《Virology Journal》发表创新成果，通过构建含EGFP荧光素酶双报告基因的AiV假病毒系统，首次实现了该病毒在细胞和动物水平的可视化追踪。研究采用三质粒共转染技术（含pEGFP-C1-P1、Replicon和pCAG-T7pol），结合透射电镜和Western blot验证假病毒形态与抗原性，从11种细胞中筛选敏感靶细胞，并建立不同品系小鼠的感染模型，利用IVIS Spectrum活体成像系统动态监测病毒分布。

主要技术方法

1. 基于粪便样本GZ1998(MK071700)构建P1衣壳蛋白表达质粒pEGFP-C1-P1和基因组骨架Replicon
2. 优化转染参数（质粒比例1:3、细胞密度3×10⁵/孔、10%FBS）
3. 透射电镜观察30nm病毒样颗粒，Western blot验证VP1蛋白表达
4. 通过TCID₅₀测定假病毒滴度达2.29×10⁶/mL
5. 生物发光成像分析BALB/c小鼠腹腔感染后24h信号峰值

研究结果

1. 质粒构建与鉴定：成功构建pEGFP-C1-P1（2616bp P1基因）和Replicon（含5'UTR-L-Luc-P2-P3-3'UTR），电镜显示假病毒具有典型二十面体结构。
   

   

2. 细胞嗜性筛选：HeLa细胞RLU值最高（较Hep-2高1.8倍），而肠道来源的Caco-2细胞敏感性仅为HeLa的35%，揭示AiV可能通过非经典肠道受体入侵。
   

   

3. 动物模型优化：BALB/c小鼠腹腔注射后24h腹部信号最强（10⁸RLU），而灌胃组信号减弱90%，证实腹腔是理想感染途径。
   

   

结论与意义
该研究突破性建立了AiV假病毒可视化研究平台，首次证实：①P2A自剪切肽能有效分离EGFP与VP1而不影响衣壳组装；②假病毒在哺乳动物细胞中呈现与野生病毒相似的嗜性特征；③腹腔感染模型可模拟AiV腹部器官趋向性。这些发现为解析AiV跨种传播机制、评估中和抗体效价提供了关键技术支撑，尤其对开发针对胃肠炎的多价疫苗具有重要指导价值。未来研究可进一步探索VP1蛋白与宿主受体的互作机制，以及假病毒在灵长类动物模型中的适用性。