外泌体miR-let-7e-5p通过Rictor/AKT1信号通路调控布鲁氏菌病患者巨噬细胞M2极化的机制研究

本研究针对布鲁氏菌病慢性感染机制不明的问题，揭示了患者血清外泌体（exosomes）中miR-let-7e-5p的异常下调通过靶向Rictor/AKT1信号通路促进巨噬细胞M2极化的新机制。研究人员通过高通量测序、双荧光素酶报告基因等技术，证实miR-let-7e-5p-Rictor/AKT1轴是调控免疫逃逸的关键靶点，为开发基于外泌体miRNA的诊疗策略提供理论依据。

　　

布鲁氏菌病作为一种人畜共患病，其病原体布鲁氏菌（Brucella）擅长躲避免疫系统并在巨噬细胞内长期存活，导致慢性感染难以根治。这种"潜伏"能力与巨噬细胞极化密切相关——当巨噬细胞从促炎的M1型转变为抗炎的M2型时，会为细菌提供更适宜的生存环境。尽管已知外泌体携带的microRNA（miRNA）在细胞间通讯中扮演重要角色，但它们在布鲁氏菌病中如何调控巨噬细胞极化仍是未解之谜。

新疆维吾尔自治区人民医院临床实验中心的研究团队在《European Journal of Medical Research》发表的研究，首次揭示了患者血清外泌体中miR-let-7e-5p的异常下调通过Rictor/AKT1信号通路驱动巨噬细胞M2极化的分子机制。这项研究不仅阐明了布鲁氏菌免疫逃逸的新策略，还为开发靶向外泌体miRNA的干预手段提供了理论依据。

研究人员运用了以下关键技术：1）从30例患者和健康对照血清中分离外泌体并通过纳米颗粒追踪分析（NTA）和透射电镜（TEM）表征；2）高通量测序筛选差异表达miRNA；3）THP-1细胞体外极化模型结合流式细胞术检测M1/M2标志物（CD86/CD206）；4）双荧光素酶报告基因验证miR-let-7e-5p与Rictor的靶向关系；5）Western blot分析Rictor/AKT1通路蛋白表达。

研究结果

血清外泌体鉴定
通过TEM观察到直径约208.8 nm的典型外泌体结构，Western blot检测到CD9、CD63、CD81标志蛋白表达。值得注意的是，患者外泌体粒径显著大于健康对照，提示炎症刺激可能改变外泌体特性。

外泌体促进M2极化
Dil标记实验证实THP-1细胞可内化血清外泌体。流式细胞术显示患者外泌体处理组CD206⁺ M2型巨噬细胞比例显著增加，细胞因子检测发现IL-10水平升高而IL-1β无变化，表明外泌体具有诱导M2极化的能力。

miR-let-7e-5p的调控作用
高通量测序发现患者外泌体中miR-let-7e-5p表达量仅为对照的31%。过表达该miRNA可使M1标志物CD86和IL-1β上升，同时抑制CD206和IL-10表达，证明其具有逆转M2极化的功能。

Rictor/AKT1通路验证
生物信息学预测和双荧光素酶实验证实Rictor是miR-let-7e-5p的直接靶标。过表达Rictor能激活AKT1 Ser⁴⁷³位点磷酸化，并抵消miR-let-7e-5p的抑极化作用。

结论与意义

该研究首次阐明布鲁氏菌病中"外泌体miR-let-7e-5p↓→Rictor/AKT1↑→M2极化↑"的级联调控轴，为理解慢性感染机制提供了新视角。Shuling Li等发现的这一通路具有双重价值：一方面可作为疾病活动性的生物标志物，另一方面为开发靶向外泌体miRNA的免疫调节疗法（如工程化外泌体递送let-7e-5p）奠定基础。鉴于mTORC2/AKT通路在多种感染性疾病中的保守性，该发现还可能为结核病等慢性感染的诊疗提供跨病种参考。