脐带源间充质干细胞（UC-MSCs）混合培养策略：实现表型稳定与免疫调节功能均一化的制造路径

为解决间充质干细胞（MSCs）临床应用中的批次间异质性问题，斯洛文尼亚输血医学研究所团队开发了多供体脐带源MSCs（UC-MSCs）混合培养方案（EQ-MSCs）。研究表明，EQ-MSCs在表型特征（CD29/CD90/CD105阳性）、多向分化能力（成骨/成脂/成软骨）及免疫调节功能（PD-L1/ICAM-1表达与T细胞增殖抑制）方面均与单供体UC-MSCs相当，为规模化生产均质化MSCs产品提供了新思路。

　　

在再生医学领域，间充质干细胞（Mesenchymal Stromal Cells, MSCs）因其独特的免疫调节能力和多向分化潜能被视为“万能修复工具”。然而，这类细胞的临床应用长期受困于一个棘手问题——不同供体来源的MSCs在功能特性上存在显著差异，就像同一型号的医疗器械因生产批次不同而性能参差不齐。这种异质性主要源于供体个体差异（如年龄、健康状况）和制造工艺波动，导致临床试验结果时好时坏，难以形成标准化治疗方案。

针对这一行业痛点，斯洛文尼亚输血医学研究所（Slovenian Institute for Transfusion Medicine）的Urban ?vajger团队独辟蹊径，提出“混合培养”的创新策略。他们从脐带组织中获取MSCs（UC-MSCs），将多个健康供体的细胞在早期传代阶段进行混合培养，创造出名为“等效能MSCs”（Equipotent MSCs, EQ-MSCs）的新型细胞产品。这项发表于《Tissue and Cell》的研究证实，这种“鸡尾酒”式的混合方案不仅能保留单供体细胞的优质特性，还能显著提升产品批次间的一致性，为MSCs的工业化生产铺平了道路。

研究团队运用三大关键技术：通过流式细胞术系统分析表面标志物（CD29/CD44/CD73等）；采用三系分化实验（成脂/成骨/成软骨）评估干细胞潜能；建立PBMCs（外周血单个核细胞）共培养体系量化免疫抑制功能。特别值得注意的是，所有脐带样本均来自斯洛文尼亚波斯托伊纳妇产医院剖宫产产妇，并通过伦理审查确保合规性。

表型分析揭示稳定性
通过对比单供体UC-MSCs与EQ-MSCs的表面标志物表达，研究发现两者均高表达经典MSC标记物（CD29>98%、CD90>99%），且混合培养未改变CD146/CD166等次级标记的表达模式。更令人振奋的是，这种表型稳定性在连续传代过程中始终得以保持，说明混合策略不会引发细胞特性漂移。

形态与分化能力高度保守
显微镜下观察显示，EQ-MSCs保持着典型的纺锤状形态，集落形成能力（反映干细胞自我更新潜力）与单供体细胞无统计学差异。当研究人员用特殊诱导剂处理这些细胞时，它们同样能分化为脂肪细胞（油红O染色阳性）、骨细胞（茜素红染色阳性）和软骨细胞（阿尔新蓝染色阳性），证明混合操作未损害其多能性。

免疫调节功能可调控
在模拟炎症环境的实验中，干扰素γ（IFN-γ）刺激使EQ-MSCs显著上调PD-L1、PD-L2等免疫检查点分子，以及细胞间黏附分子ICAM-1的表达。功能实验显示，当与活化T细胞共培养时，EQ-MSCs表现出剂量依赖性的增殖抑制效果，且抑制强度与单供体细胞相当，这种特性使其特别适用于自身免疫疾病治疗。

这项研究的突破性在于，它首次系统论证了“混合供体”策略的科学可行性。通过巧妙的实验设计，研究人员证实EQ-MSCs既保留了单供体细胞的治疗优势，又有效平滑了供体间差异带来的波动。这种创新方法不仅能降低生产成本（减少扩增代次），更重要的是为药品监管部门建立MSCs质量控制标准提供了实证依据。正如作者在讨论部分强调的，当MSCs从“个体化治疗”迈向“标准化药品”时，解决异质性问题将成为推动整个领域发展的关键支点。未来，这种策略或可延伸至其他组织来源的MSCs，甚至为干细胞产品的国际标准化提供模板。