猪流行性腹泻病毒Nsp14通过线粒体自噬降解MAVS拮抗宿主先天免疫并促进病毒增殖的机制研究

这篇研究揭示了猪流行性腹泻病毒（PEDV）非结构蛋白Nsp14通过介导线粒体自噬受体NDP52与线粒体外膜蛋白TOM20的相互作用，诱导线粒体自噬（mitophagy），导致线粒体抗病毒信号蛋白（MAVS）降解，从而抑制干扰素-β（IFN-β）产生并促进病毒增殖。该研究阐明了PEDV免疫逃逸的新机制，为开发抗病毒靶点提供了理论依据。

　　

PEDV Nsp14抑制IFN-β产生
猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染显著抑制宿主细胞中干扰素-β（IFN-β）的mRNA表达，尤其在感染后36小时抑制效果最显著。通过筛选PEDV编码的16种非结构蛋白（Nsps）和结构蛋白，发现Nsp14对IFN-β的抑制作用最为突出。进一步实验证实，Nsp14以剂量和时间依赖性方式抑制IFN-β的产生，且在PEDV感染背景下同样有效。

Nsp14通过自噬溶酶体途径降解MAVS
研究表明，Nsp14通过靶向线粒体抗病毒信号蛋白（MAVS）抑制IFN-β的产生，但不影响MAVS的mRNA水平。免疫印迹（WB）显示Nsp14以时间和剂量依赖性方式降低MAVS蛋白水平。通过抑制剂实验发现，自噬抑制剂3-MA、溶酶体抑制剂氯喹（CQ）和巴弗洛霉素A1（BafA1）可逆转Nsp14介导的MAVS降解，而蛋白酶体抑制剂MG132无此作用。共聚焦显微镜观察到MAVS与自噬标志物GFP-LC3的共定位增强，证实Nsp14通过自噬溶酶体途径降解MAVS。

Nsp14诱导线粒体自噬
Nsp14显著降低线粒体外膜蛋白TOM20的丰度，且线粒体自噬抑制剂Mdivi-1可阻断这一过程。共聚焦显微镜和透射电镜（TEM）显示，Nsp14表达导致线粒体与自噬体（GFP-LC3）及溶酶体（LysoTracker）的共定位增加，线粒体嵴结构破坏并被自噬体包裹，明确证实Nsp14诱导线粒体自噬。

Nsp14介导NDP52与TOM20的相互作用
通过His-Nsp14 pull-down联合质谱分析，鉴定出NDP52和TOM20是Nsp14的相互作用蛋白。免疫共沉淀（IP）和共聚焦显微镜证实Nsp14与内源性NDP52和TOM20结合，且在PEDV感染细胞中同样存在这种相互作用。进一步研究发现，Nsp14介导NDP52与TOM20的结合，从而将NDP52招募至线粒体，触发线粒体自噬。

Nsp14通过NDP52依赖性线粒体自噬降解MAVS
NDP52敲低（siNDP52）可逆转Nsp14诱导的TOM20和MAVS降解，并恢复IFN-β的产生。在PEDV感染模型中，Nsp14或NDP52敲低以及Mdivi-1处理均能抑制病毒诱导的线粒体自噬，恢复MAVS蛋白水平，增强IFN-β表达，并显著降低病毒RNA水平、N蛋白表达和病毒滴度（TCID₅₀）。而在IFN缺陷型Vero细胞中，MAVS降解对病毒增殖无影响，表明Nsp14的作用依赖于宿主先天免疫应答。

研究意义与展望
该研究首次阐明PEDV Nsp14通过NDP52-TOM20轴诱导线粒体自噬，降解MAVS以逃逸宿主免疫监视的分子机制，为理解冠状病毒免疫逃逸策略提供了新视角。线粒体自噬作为病毒感染的共同靶点，可能成为广谱抗病毒药物开发的潜在方向。未来需进一步解析Nsp14的关键功能域，并通过体内实验验证其致病机制。