Forskolin增强无血清培养人脂肪干细胞分泌尿激酶纤溶酶原激活物及促血管生成活性的机制研究

本研究揭示了Forskolin（FSK）在无血清培养条件下显著增强人脂肪来源干细胞（ASCs）分泌尿激酶纤溶酶原激活物（uPA）的分子机制，证实其通过ERK1/2通路激活促进血管生成和内皮细胞迁移，为开发高效、安全的细胞治疗策略提供了新思路。

　　

Abstract
脂肪来源干细胞（ASCs）因其易获取性和多向分化潜能成为再生医学研究热点。本研究创新性地采用无血清培养基（PRIME-XV MSC Expansion XSFM），通过72小时短期刺激方案，系统评估了Forskolin（FSK）单独或联合生长因子（bFGF/PDGF-AA/NRG-1）对ASCs分泌功能的影响。

1 Introduction
传统培养依赖胎牛血清（FBS）存在免疫原性和批次差异风险。ASCs分泌组中尿激酶纤溶酶原激活物（uPA）作为丝氨酸蛋白酶，通过激活纤溶酶原促进细胞外基质降解，在组织重塑中起关键作用。前期研究多聚焦癌症领域，而其在干细胞治疗中的调控机制尚不明确。

2 Results
2.1 基因表达与蛋白分泌
FSK单独处理使PLAU（uPA编码基因）和IGF-I表达上调2-3倍（p<0.05），ELISA检测显示uPA分泌量较对照组增加4倍（p<0.01），且细胞内储备同步提升。值得注意的是，生长因子单独处理未达统计学显著性。

2.2 信号通路解析
磷酸化蛋白芯片揭示ERK1/2通路显著激活。Western blot验证p-ERK1/2在FSK组表达量较对照组提升300%，但ERK抑制剂PD98059仅部分抑制uPA分泌（约50%），提示存在非ERK依赖途径。

2.3 功能学验证
血管生成实验显示，FSK+GFs条件培养基使HUVECs形成封闭管网数量增加2.5倍（p<0.01）。划痕实验证实uPA特异性抑制剂BC-11使内皮细胞迁移率降低60-80%（p<0.001），而真皮成纤维细胞迁移无显著变化，表明uPA作用具有细胞类型特异性。

3 Discussion
相比传统2周刺激方案，72小时短期处理即可显著增强ASCs治疗潜力。XSFM培养基中残留bFGF（约1.2 ng mL^-1）可能解释GFs协同效应较弱的现象。uPA通过降解纤维蛋白和激活基质金属蛋白酶（MMPs）的双重机制促进血管新生，这为缺血性疾病治疗提供了新靶点。

4 Conclusion
研究建立了符合GMP标准的短期刺激方案，证实FSK可通过多通路协同增强ASCs分泌组功能。未来需进一步解析cAMP-PKA与ERK1/2的crosstalk机制，并开展动物模型验证。

5 Experimental Section
实验采用6例腹部脂肪来源ASCs（平均BMI 27.6 kg m^-2），流式验证CD73/CD90/CD105阳性率>95%。所有功能学实验均设XSFM培养基对照，统计学分析采用ANOVA与Bonferroni校正。