VSVd51-GM-CSF溶瘤病毒疗法在膀胱癌治疗中超越BCG：临床前与转化模型的突破性发现

本研究针对卡介苗(BCG)治疗失败的非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)患者，开发了携带粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因的减毒水疱性口炎病毒(VSVd51-GM-CSF)新型疗法。通过膀胱癌类器官(PDO)和两种小鼠模型证实，该疗法通过诱导更强的免疫原性细胞死亡(ICD)和M1型巨噬细胞极化，显著提升抗肿瘤免疫应答，在BCG治疗失败场景中仍能延长生存期，为临床转化提供重要依据。

　　

膀胱癌是全球高发恶性肿瘤，其中75%初诊为非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)。尽管卡介苗(BCG)膀胱灌注是50年来的标准疗法，但40%-60%的高危患者会出现复发或进展。对于BCG治疗失败的患者，根治性膀胱切除术虽能挽救生命，却带来严重生活质量问题，且转移后患者中位生存期仅12-31.5个月。更严峻的是，全球正面临BCG短缺危机，亟需开发新型膀胱保留疗法。

加拿大舍布鲁克大学(Université de Sherbrooke)免疫与细胞生物学系的研究团队将目光投向溶瘤病毒(OV)领域。这类"会自我复制的移动药房"能选择性裂解肿瘤细胞，同时携带免疫刺激因子重塑肿瘤微环境(TME)。研究人员特别关注基质蛋白突变的减毒水疱性口炎病毒VSVd51，其安全性优于腺病毒等常见OV，且人群预存抗体率低。团队此前已证实携带小鼠GM-CSF的VSVd51在MB49膀胱癌模型中效果显著，但尚缺乏与BCG的直接对比及在BCG失败场景中的验证。

研究采用四大关键技术方法：(1)建立小鼠MB49原位膀胱癌模型和致癌物BBN诱导的自发肿瘤模型；(2)培养4株人膀胱癌细胞系和2例患者来源类器官(PDO)的3D球体；(3)通过流式细胞术分析M1/M2巨噬细胞标志物(CD80/CD86 vs CD163/CD206)；(4)48重细胞因子检测分析治疗后的免疫微环境变化。

VSVd51-GM-CSF治疗比BCG更能减少细胞活力并增强ICD
在MB49小鼠膀胱癌细胞和T24等4株人源细胞系中，VSVd51-GM-CSF在多重感染复数(MOI)下诱导的细胞死亡率显著高于BCG。关键免疫原性死亡标志物检测显示，VSVd51-GM-CSF组ATP释放量增加3.5倍，钙网蛋白(ecto-calreticulin)表达提升2倍，HMGB1和HSP90释放量也显著增高，证实其诱导ICD的能力更强。

VSVd51-GM-CSF促进M1型巨噬细胞极化
人膀胱癌细胞球体培养实验发现，VSVd51-GM-CSF的条件培养基使CD14⁺单核细胞高表达CD80/CD86(M1标志)，而BCG组则诱导CD163/CD206(M2标志)表达。直接感染实验证实，这种极化作用需要活病毒参与，单纯重组GM-CSF或灭活病毒无效。更有意义的是，VSVd51-GM-CSF还能将已极化的M2型巨噬细胞逆转为M1表型。

PDO模型验证临床转化潜力
在BLC-38和BLC-35患者来源类器官中，VSVd51-GM-CSF诱导的细胞死亡率和ATP释放量分别是BCG组的2.1倍和1.8倍。将处理后的条件培养基与自体PBMC共培养，可见树突状细胞(DC)的PD-L1表达降低，而NK细胞的CD107a脱颗粒和穿孔素/颗粒酶B表达增加，表明能逆转免疫耗竭状态。

细胞因子风暴重塑TME
48重细胞因子检测显示，VSVd51-GM-CSF处理的PDO分泌GM-CSF水平超BCG组200倍，同时诱导CXCL9/10等T细胞趋化因子高表达。这种"细胞因子风暴"可解释后续观察到的免疫细胞浸润增加现象。

小鼠模型证实治疗优势
在MB49原位模型中，VSVd51-GM-CSF组肿瘤内CD86⁺F4/8