鸡ANXA2与EtSERPIN1互作介导柔嫩艾美耳球虫黏附入侵的关键机制及疫苗潜力

本研究揭示了柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)表面蛋白EtSERPIN1通过结合宿主膜蛋白ANXA2介导孢子虫入侵的分子机制。山东农业大学团队运用GST pull-down、酵母双杂交等技术证实该互作关系，发现重组GgANXA2可显著抑制寄生虫感染，且EtSERPIN1免疫诱导的黏膜抗体展现出抗球虫活性，为开发新型抗球虫靶点提供理论依据。

　　

禽类球虫病是全球家禽养殖业的重大威胁，每年造成数十亿美元经济损失。当前防控主要依赖抗球虫药和活疫苗，但耐药性、药物残留及活疫苗安全性等问题日益突出。柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)作为致病性最强的鸡球虫之一，其入侵宿主细胞的分子机制尚不明确。山东农业大学预防兽医学系的研究团队在《Veterinary Research》发表的研究，首次揭示了寄生虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(EtSERPIN1)通过结合宿主膜联蛋白A2(GgANXA2)介导黏附入侵的分子机制，为开发新型抗球虫策略提供了关键靶点。

研究采用酵母表面展示系统验证EtSERPIN1的黏附功能，通过GST pull-down联合质谱筛选宿主互作蛋白，利用酵母双杂交和免疫共沉淀确认EtSERPIN1-GgANXA2特异性结合。体内外实验证明重组GgANXA2可阻断孢子虫入侵，动物模型显示EtSERPIN1免疫显著降低盲肠病变和卵囊排出量。

EtSERPIN1在孢子虫表面表达并参与黏附入侵过程
免疫荧光证实EtSERPIN1在孢子虫(SZ)、裂殖体(mSC)和配子体(Gt)阶段持续表达，Western blot检测到42kDa分泌型与45kDa膜结合型两种形式。抗体阻断实验显示抗EtSERPIN1多克隆抗体(pAb)可剂量依赖性抑制孢子虫入侵DF-1细胞达48.77%，酵母展示系统证明其直接介导宿主细胞黏附。

EtSERPIN1与GgANXA2特异性互作
GST pull-down从鸡盲肠上皮膜蛋白中筛选出27个候选蛋白，经亚细胞定位预测锁定ANXA家族成员。酵母双杂交证实EtSERPIN1仅与GgANXA2互作，GST pull-down验证该结合特异性，免疫荧光显示重组His-GgANXA2可结合孢子虫表面。

GgANXA2阻断显著抑制寄生虫感染
重组GgANXA2预处理使酵母-EtSERPIN1黏附率从44.32%降至26.75%，抗ANXA2抗体阻断实验获得类似效果。体外入侵实验显示150μg/mL rHis-GgANXA2处理使孢子虫入侵率降低61.2%，动物实验证实其可减少盲肠寄生虫负荷和病变评分。

重组EtSERPIN1展现疫苗潜力
免疫鸡群血清IgG和盲肠sIgA水平显著升高，攻毒后体重增长提高65.6%，卵囊排出量减少55.6%，抗球虫指数(ACI)达170.14，显示中等保护效力。

该研究首次阐明EtSERPIN1-GgANXA2互作是E.tenella入侵的分子开关，突破性发现分泌型与膜结合型EtSERPIN1的协同作用机制。重组GgANXA2的入侵抑制效应为开发阻断剂提供直接证据，而EtSERPIN1诱导的黏膜免疫应答为亚单位疫苗设计开辟新路径。研究不仅完善了顶复门寄生虫入侵理论，更为解决抗药性难题提供了替代方案，具有重要临床应用价值。