基于超折叠绿色荧光蛋白(sfGFP)标记技术可视化研究伪结核棒状杆菌的巨噬细胞感染机制

为解决伪结核棒状杆菌(CP)感染过程的动态监测难题，研究人员构建了pXMJ19-sfGFP质粒系统，实现CP中sfGFP的持续表达。研究发现该标记不影响细菌生物学特性，并通过巨噬细胞和小鼠感染模型证实：在氯霉素选择压力下质粒稳定性良好，而磷脂酶D(pld)突变显著降低CP的巨噬细胞感染率。该技术为胞内病原体感染机制研究提供了可视化工具。

　　

这项突破性研究为追踪伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis, CP)的感染过程开发了"细菌荧光追踪器"——研究人员巧妙地将超折叠绿色荧光蛋白(superfolder green fluorescent protein, sfGFP)基因装载到pXMJ19质粒上，构建出能持续发光的工程菌株。就像给细菌安装了微型信号灯，这种标记技术既不会干扰细菌的正常生长和致病性，又能让科学家们通过荧光显微镜实时观察CP在巨噬细胞内的"潜伏行动"。

实验数据显示，在含有氯霉素的培养条件下，这些发光细菌能稳定携带"荧光身份证"。但有趣的是，一旦撤除抗生素压力，部分细菌就会"丢弃"这个标记质粒。更关键的是，当研究人员比较野生型CP和磷脂酶D(phospholipase D, pld)突变体的感染能力时，流式细胞仪捕捉到鲜明对比：正常CP像熟练的特种兵一样高效入侵巨噬细胞，而缺失pld武器的突变株则明显"战斗力"下降。这项技术不仅照亮了CP的感染路径，更为研究其他胞内病原体的入侵机制提供了新的光学探针。