鼻内神经氨酸酶疫苗联合细菌膜衍生佐剂：突破流感疫苗交叉保护瓶颈的创新策略

本研究针对当前流感疫苗株特异性保护不足的难题，开发了基于重组神经氨酸酶(rNA-N1-MPP)的鼻内疫苗，联合脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白(BDX100/BDX301)佐剂系统。研究证实该方案能显著增强黏膜IgA/IgG应答，诱导肺组织驻留记忆T细胞(TRM)，对同源H1N1病毒提供完全保护，并对异源H5N1病毒实现部分交叉保护。这项发表于《npj Vaccines》的研究为开发广谱流感疫苗提供了新思路。

　　

流感病毒每年造成全球数百万人感染，传统疫苗主要靶向血凝素(HA)头部结构域，但该区域易发生抗原漂移导致疫苗保护力下降。更棘手的是，当前疫苗难以诱导黏膜免疫应答——而呼吸道黏膜正是病毒入侵的首要门户。面对这些挑战，科学家将目光转向了流感病毒另一个表面蛋白：神经氨酸酶(NA)。与HA相比，NA的抗原表位更保守，且能阻断病毒在黏膜中的扩散，但单独使用重组NA免疫原性较弱，亟需安全有效的黏膜佐剂系统。

美国西奈山伊坎医学院(Icahn School of Medicine at Mount Sinai)的研究团队创新性地将重组NA与细菌膜衍生佐剂联用。他们构建了含麻疹病毒磷蛋白四聚化域(MPP)的稳定rNA-N1-MPP抗原，联合脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白复合物佐剂(BDX100含志贺氏菌LPS，BDX301含内源性LPS)，通过鼻内接种途径评估其免疫保护效果。研究采用BALB/c和C57BL/6小鼠模型，通过流式细胞术分析鼻相关淋巴组织(NALT)和肺部的免疫细胞亚群，结合ELISA和神经氨酸酶抑制试验(NAI)检测体液免疫，并采用致死剂量病毒攻击验证保护效果。

佐剂增强系统性免疫应答
BDX100和BDX301显著提升血清中抗NA IgG水平，NA抑制抗体效价(ID₅₀)对同源H1N1毒株提高10倍以上。虽然免疫应答仍偏向Th2型(IgG1/IgG2a比值较高)，但佐剂组在脾脏中诱导了更多滤泡辅助T细胞(Tfh)和活化B细胞。

上呼吸道黏膜免疫激活

鼻内接种后，NALT中GC B细胞和Tfh细胞比例显著增加3-4倍，鼻洗液中检测到特异性IgA。通过18色流式Panel的PhenoGraph聚类分析发现，佐剂组CD69⁺CD44⁺效应记忆T细胞(Cluster 1)和PD-1⁺CD185⁺ Tfh(Cluster 2)显著富集。

下呼吸道保护性免疫形成
肺部出现CD69⁺CD103⁺组织驻留记忆CD4⁺ T细胞(TRM)，其中BDX100组比BDX301组诱导更多TRM。支气管肺泡灌洗液(BALF)中IgG水平提升5倍，BDX100组IgA反应尤为突出。

交叉保护效果验证

虽然对异源H5N1毒株(NA同源性88.9%)的NA抑制活性未达检测阈值，但佐剂疫苗仍使存活率从0%提升至60%。PCA分析揭示保护与肺部IL-17A水平、中性粒细胞浸润正相关，而Th2型反应(IL-5升高)与不良预后相关。

这项研究首次系统评估了细菌膜佐剂增强的NA黏膜疫苗效果。其创新点在于：①采用限制性鼻内接种(5μL/鼻孔)仍能激活远端肺组织免疫；②明确了非中和抗体也可能通过ADCC等机制提供交叉保护；③为应对H5N1等禽流感威胁提供了新策略。局限性在于小鼠模型无法完全模拟人类预存免疫力，且对远缘NA亚型(如New Caledonia/1999 H1N1)保护有限。未来研究可探索NA与其他保守抗原的组合，或优化佐剂配比以增强Th1应答。该成果为开发"超季节性"流感疫苗奠定了重要基础。