新型视网膜下出血小鼠模型中局部小胶质细胞的激活标记与机制研究

本研究针对视网膜下出血(SRH)引发的神经炎症难题，开发了创新性的血液与霍乱毒素亚基B(CtB)共注射技术，首次实现注射位点精准标记与微胶质细胞激活动态追踪。匈牙利佩奇大学团队通过建立SRH小鼠模型，发现出血区域邻近内视网膜层出现显著微胶质细胞激活，并揭示磷酸盐缓冲液(PBS)对照组的机械损伤效应差异。该研究为靶向视网膜神经炎症治疗策略提供了重要实验基础。

　　

视网膜作为中枢神经系统的特殊延伸部分，是视觉信息传递的重要门户。然而，视网膜下出血(SRH)这种血液积聚在神经感觉视网膜与视网膜色素上皮(RPE)之间的病理状态，常导致不可逆的视力损伤。临床数据显示，SRH多继发于年龄相关性黄斑变性(AMD)、外伤或糖尿病等系统性疾病，其病理机制涉及铁离子毒性、营养运输障碍和炎症反应等多重因素。尽管已知微胶质细胞作为视网膜常驻免疫细胞参与该过程，但出血区域与邻近组织的精确免疫应答图谱仍不清楚，这严重制约了针对性治疗策略的开发。

匈牙利佩奇大学Szentágothai研究中心的Boglarka Balogh等研究人员在《Scientific Reports》发表的研究，通过创新性地共注射自体血液与荧光标记的霍乱毒素亚基B(CtB-A555)，建立了可精确定位出血边界的新型SRH小鼠模型。研究发现，出血24小时后，注射区域(Z1)及相邻区域(Z2)的内视网膜层出现显著微胶质细胞激活，而远端区域(Z3)与对照眼(Z4)则保持静息状态。特别值得注意的是，研究首次采用PBS注射作为对照，明确了血液特异性激活效应——血液诱导的激活反应强度是机械损伤的3倍，且激活范围远超注射位点。此外，在RPE层观察到具有吞噬特征的微胶质细胞/巨噬细胞浸润，这些发现为理解SRH的时空免疫应答提供了全新视角。

研究团队运用多项关键技术：1)玻璃微针穿刺的亚视网膜注射技术建立SRH模型；2)CtB-A555共注射实现出血边界可视化；3)全视网膜铺片与抗离子钙结合适配分子1(IBA1)免疫荧光标记；4)共聚焦激光扫描显微镜(cLSM)三维成像；5)自动化形态分析软件MotiQ量化微胶质细胞动态。实验选用C57BL/6J雄性小鼠，通过尾静脉采血获取自体血液，设置血液注射组、血液+CtB组、PBS对照组及未处理对照组。

【主要结果】

1. 新型SRH模型的建立
   创新性地将CtB-A555作为示踪剂与血液共注射，克服了传统金属针头引起的组织损伤问题。

   

2. 微胶质细胞的区域特异性激活
   在出血区域相邻的内视网膜层，激活微胶质细胞数量增加3.02倍(从14.79增至44.67个/视野)。

   
   深层视网膜(DL)的激活程度尤为显著，达对照组的4.41倍。

3. RPE层的免疫细胞浸润
   在健康视网膜中罕见的Iba1⁺细胞出现在RPE层，其中22%呈现巨噬细胞样形态。

   
   +细胞(红色)与紧密连接蛋白JamB(蓝色)共定位。'>

4. CtB的内化特征
   RPE层微胶质细胞可吞噬CtB-A555，而内视网膜微胶质细胞仅与其接触。

   

【结论与意义】
该研究通过多学科方法揭示了SRH后视网膜的免疫应答时空特征：1)建立了首个可精确定位出血范围的SRH模型，CtB-A555共注射技术为后续研究提供标准化工具；2)发现血液成分而非机械损伤是微胶质细胞广泛激活的主因，提示抗炎治疗时间窗；3)RPE层出现吞噬性免疫细胞，为清除血源性毒性物质提供新解释。特别值得注意的是，

，这种形态变化可作为治疗响应的生物标志物。研究成果不仅为SRH的病理机制提供新见解，其技术方案还可拓展至糖尿病视网膜病变等出血性眼病研究，具有重要的临床转化价值。