系统性肥大细胞增多症中肥大细胞流式分析的临界陷阱与精准诊断策略优化

【编辑推荐】本综述系统剖析了流式细胞术（MFC）诊断系统性肥大细胞增多症（SM）的关键干扰因素，提出通过引入CD203c和活性染料DRAQ7优化MC（肥大细胞）识别，并首创线性计算法（Log(Ag–ref)）精准量化CD25/CD2/CD30表达，将SM诊断准确率提升至Youden指数0.96。研究为低丰度MC（中位0.01%）和强自发荧光导致的误诊难题提供解决方案。

　　

ABSTRACT

系统性肥大细胞增多症（SM）是一种以肥大细胞（MC）异常活化和增殖为特征的克隆性疾病。流式细胞术（MFC）通过检测骨髓（BM）中MC的CD25、CD2和CD30异常表达实现诊断，但MC低丰度（中位<0.01%）、抗原非特异性和强自发荧光常导致误判。研究通过整合文献与专家共识，提出CD117/CD45/CD203c/FcεR1组合可有效区分MC与凋亡粒细胞（模拟CD117/CD25/CD2/CD30假阳性），并证实线性计算净表达量（Log(Ag–ref)）较传统对数转换法显著提升SM预测准确率（CD25/2/30的Youden指数分别达0.96/0.93/0.88）。

1 Introduction

肥大细胞（MC）作为先天免疫系统的造血细胞，在SM中发生克隆性扩增，引发皮肤、胃肠等多系统症状。SM诊断依赖WHO/ICC标准，其中MC异常抗原表达是最敏感的指标之一。然而，BM中MC的极低丰度、CD117与髓系前体细胞（如原始粒细胞）的交叉表达，以及MC自身的高异质性自发荧光，使得流式分析面临严峻挑战。

2 Methods

研究纳入492例疑似SM患者骨髓样本，采用双Panel策略（四色常规诊断Panel+八色扩展Panel）。通过CD45/CD117骨架结合CD203c区分MC与CD117⁺髓系前体细胞，并引入活性染料DRAQ7排除凋亡粒细胞干扰。采用线性计算法（Log(Ag–ref)）量化CD25/CD2/CD30净表达，对比传统对数转换法（Log(Ag)–log(ref)）和"自发荧光+2SD"法的准确性。

3 Results

• MC识别优化：CD203c可有效区分AdvSM中CD117^dim的未成熟MC与髓系前体细胞；DRAQ7消除凋亡粒细胞（占90%假阳性）的干扰。
• 表达量化突破：线性计算法使CD25/CD2/CD30的SM预测准确率分别达96%/94%/90%，显著优于对数转换法（CD2准确率仅84%）。
• 临床验证：196例SM患者中97%检出CD25/CD2/CD30异常，而传统方法漏诊率高达10%。

4 Discussion

研究颠覆了流式分析SM的三大传统认知：

1. 标记策略：CD203c必须纳入MC识别骨架，避免AdvSM与AML的误诊；
2. 活性检测：凋亡粒细胞通过非特异性结合模拟MC表型，DRAQ7可消除这一主要干扰源；
3. 算法革新：线性计算（Log(Ag–ref)）克服MC自发荧光异质性，使弱表达抗原（如CD30）的检测灵敏度提升38%。

5 应用前景

该方案已成功应用于MMCAS（单克隆MC活化综合征）的早期诊断，并为SM-AHN（伴随血液肿瘤的SM）的微小残留病灶监测提供新工具。未来或可拓展至其他CD117⁺肿瘤（如GIST）的流式检测体系。