基于HABA配体的亲和层析技术优化及其在亲和素纯化中的应用

为解决亲和素(AV)纯化过程中高结合力导致的难题，研究人员开发了基于4-羟基偶氮苯-2-羧酸(HABA)的新型亲和基质。通过设计三种乙二胺类间隔臂（乙二胺、三乙烯四胺和五乙烯六胺），结合响应面法优化出最佳吸附条件：50 mM柠檬酸盐缓冲液pH 5.6 + 425 mM NaCl，最终实现82%纯度的AV回收，为工业化生产提供了可行方案。

　　

这项研究聚焦于解决亲和素(avidin, AV)纯化的技术瓶颈。作为诊断试剂盒中广泛使用的生物偶联蛋白，AV与生物素(biotin)的超强结合力反而成为其亲和纯化的障碍。科研团队另辟蹊径，选择结合力较弱的4-羟基偶氮苯-2-羧酸(4-hydroxyazobenzene-2-carboxylic acid, HABA)作为配体，将其固定于琼脂糖(agarose)基质。

研究团队设计了三组不同长度的乙二胺类间隔臂：乙二胺(ethylenediamine)、三乙烯四胺(triethylenetetramine)和五乙烯六胺(pentaethylenehexamine)，通过计算机模拟(in silico)与实验验证相结合，发现中等长度的三乙烯四胺间隔臂效果最佳。采用响应面法(response surface methodology)系统优化后，确定最佳吸附条件为50 mM柠檬酸盐缓冲液(pH 5.6)配合425 mM NaCl，在保证AV高效吸附的同时显著降低非特异性结合。

洗脱阶段采用pH梯度法，当pH升至10时成功实现AV解离。整套工艺最终获得82%纯度的AV产品。这项研究不仅建立了基于HABA配体的新型亲和纯化平台，更为禽蛋来源AV的工业化生产提供了可靠的技术路线。