AMG 329：靶向FLT3L的人源化单克隆抗体的开发与临床前特性研究及其在自身免疫疾病中的治疗潜力

这篇综述系统阐述了人源化单克隆抗体AMG 329（靶向FLT3配体）的开发历程与作用机制。研究通过噬菌体展示库筛选、亲和力优化（KD达170 pM）及Fc区沉默改造（L234F/L235E/P331S三重突变），证实其可特异性中和可溶性与细胞膜结合型FLT3L，显著降低食蟹猴外周血浆细胞样树突细胞（pDC）、常规树突细胞（cDC1/cDC2）和经典单核细胞比例，且不引发抗体依赖性细胞毒性（ADCC）或补体依赖的细胞毒性（CDC），为自身免疫疾病治疗提供新策略。

　　

ABSTRACT
FLT3/FLT3L信号通路在树突细胞（DC）和单核细胞等髓系细胞的发育与功能调控中起核心作用。研究发现FLT3L与多种自身免疫疾病相关，如类风湿性关节炎、干燥综合征和系统性红斑狼疮。AMG 329作为首个人源IgG1λ单抗，通过特异性结合FLT3L阻断其与FLT3的相互作用，从而抑制下游炎症反应。

Introduction
FLT3作为III型受体酪氨酸激酶，在造血祖细胞和特定DC亚群中组成型表达，其配体FLT3L可经TACE/ADAM17切割形成可溶性活性形式。DC作为连接先天与适应性免疫的关键桥梁，其异常活化与银屑病、系统性硬化症等疾病密切相关。尤其值得注意的是，浆细胞样DC（pDC）能大量产生I型干扰素，而常规DC（cDC）通过IL-23/IL-17等通路驱动T细胞活化。AMG 329通过靶向FLT3L这一"上游枢纽"，可同时调控pDC、cDC和单核细胞的多重病理机制。

Results
Derivation and optimization
AMG 329源自大规模人源抗体噬菌体展示库（含BMV、CS等4个文库），通过溶液相淘选和竞争性均相时间分辨荧光（HTRF）筛选获得先导克隆5D9。经两轮亲和力成熟（采用区块突变和简约突变策略），最终克隆AM40对人/食蟹猴FLT3L的亲和力分别达170 pM和63 pM，较原始克隆提升7000倍。

Species cross-reactivity
序列比对显示FLT3L胞外域在人/食蟹猴间同源性达95%，而小鼠仅73%。实验证实AMG 329可交叉结合食蟹猴FLT3L，但不识别鼠源FLT3L，这解释了为何啮齿类模型不适用于毒理学研究。

Neutralization mechanism
在RS4;11细胞模型中，AMG 329浓度≥1 nM时即可有效阻止FLT3内化（通过流式检测表面FLT3表达回升）。特别值得注意的是，该抗体还能中和CD4⁺ T细胞膜结合的FLT3L，且对SCF、M-CSF等III型激酶受体配体无交叉反应。

Safety profile
Fc区三重突变（TM）使AMG 329与FcγRI/IIIB的结合完全消失，仅保留对FcγRIIA/B的低亲和力。乳酸脱氢酶释放实验显示，即使浓度达10 μg/mL时，其ADCC活性仍低于阳性对照抗CD4抗体的1%。ELISA进一步证实其不结合补体C1q。

Primate studies
在食蟹猴5周（5剂）和27周（14剂）给药实验中，所有剂量组（5-100 mg/kg）均观察到pDC比例持续下降（p<0.001），最大降幅出现在恢复期第25-81天。cDC1和经典单核细胞的减少呈现非剂量依赖性，且不影响KLH诱导的TDAR反应，提示免疫功能保留。药代动力学显示SC给药的半衰期为7-12天，符合双周给药方案的临床设计需求。

Discussion
与传统靶向pDC或I型干扰素的疗法相比，AMG 329的创新性体现在：1）同时调控pDC/cDC/单核细胞三大病理环节；2）通过生存因子剥夺而非细胞毒作用实现靶细胞耗竭；3）保持对KLH的免疫应答能力。目前该抗体已在干燥综合征患者中开展II期临床试验（NCT06312020），为自身免疫疾病治疗开辟了新路径。

Materials and methods
关键技术包括：1）ScFv-Fc融合蛋白高通量筛选；2）Biacore T200表面等离子共振测定动力学参数；3）CD45^brightSSC^dim淋巴细胞门控策略进行流式免疫分型；4）非GLP条件下食蟹猴KLH免疫挑战实验。所有动物实验均通过AAALAC认证机构的IACUC审查。