SNP依赖性癌-睾丸抗原表位：癌症免疫治疗的新靶点

本研究通过cDNA表达克隆技术，从肢端黑色素瘤的肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）中分离T细胞受体（TCR），鉴定出由MAGE-A6基因单核苷酸多态性（SNP）编码的新型癌-睾丸（CT）抗原表位。该SNP赋予表位强免疫原性，为低肿瘤突变负荷（TMB）但高TIL浸润的"热肿瘤"提供了共享抗原靶点，凸显正向免疫学在发现SNP依赖性肿瘤抗原中的独特价值。

　　

单细胞转录组与TCR谱分析揭示肢端黑色素瘤TILs特征
通过对MEL12患者（68岁女性肢端黑色素瘤IV期）的肿瘤样本进行单细胞RNA测序（scRNA-seq）和TCR测序（scTCR-seq），研究者发现表型耗竭的CD8⁺ TILs中富集高度扩增的克隆型。其中克隆型3（TCR3）在CD8⁺ TILs中占比达4.8%，其TCR转导的T细胞对自体肿瘤细胞（ATCs）展现强烈干扰素（IFN）-γ分泌反应。

cDNA文库筛选锁定MAGE-A6 SNP表位
通过构建MEL12细胞cDNA文库并转染HEK293T/β2mKO/A*24:02细胞，筛选出两个激活TCR3的阳性克隆池。进一步鉴定显示3A11克隆编码的MAGE-A6存在c.455G>T（p.Ser152Ile）SNP。TaqMan基因分型证实患者为SNP杂合子，而TCR3仅识别含152Ile变体的表位。

HLA-A24:02限制性9肽表位的免疫特性
肽段截短实验确定最优表位为₁₄₄QYFFPVIFI₁₅₂（9-mer），其HLA-A24:02结合稳定性显著高于对照HIV肽（ΔMFI=15.2 vs 1.8）。值得注意的是，野生型（152Ser）肽完全丧失激活能力，证实SNP是免疫识别的关键。结构分析表明，152Ile更符合HLA-A*24:02的F口袋锚定偏好（偏好苯丙氨酸/异亮氨酸）。

SNP表位的抗肿瘤潜能
在MAGE-A6⁺的A375（SNP纯合子）和MO-1000细胞中，TCR3-T细胞通过CD107a脱颗粒和实时阻抗检测显示强细胞毒性（72小时杀伤率>80%）。ELISPOT实验显示该表位半数有效浓度（EC₅₀）低至0.3nM，提示高亲和力识别。

讨论：SNP表位的临床转化价值
该SNP（rs7056365）在人群频率约15%，其衍生的CT抗原表位为低TMB肿瘤（如肢端黑色素瘤）提供了"现成"的免疫靶点。与MAGE-A3/A12交叉反应导致的神经毒性不同，该表位因P2酪氨酸（Tyr）和C端Ile的双重差异，理论上可规避对正常组织的攻击。研究首次证实SNP能通过改变HLA结合基序（如F口袋锚定）增强CT抗原免疫原性，为TCR-T细胞治疗拓展了新靶点库。

方法学亮点
采用β2m/HLA单等位基因重建系统精确确定HLA限制性；通过SMARTer RACE技术直接从HLA-A24/MAGE-A6_144-152I四聚体⁺ TILs中克隆TCR基因；结合阻抗检测（Maestro Z）与传统ELISPOT多维度验证功能。这些发现为"冷肿瘤"免疫治疗提供了新思路：即使低TMB肿瘤，只要存在SNP修饰的共享抗原和高浸润TILs，仍可能产生有效抗肿瘤应答。