头颈部鳞状细胞癌中成熟三级淋巴结构与HPV状态及抗PD-1化疗免疫治疗响应的相关性研究

这篇研究通过整合TCGA-HNSC转录组数据、单细胞测序（scRNA-seq）和多光谱免疫组化（mIHC），揭示了成熟三级淋巴结构（TLS）在HPV阳性头颈鳞癌（HNSCC）及抗PD-1化疗免疫治疗响应者中的关键作用。研究发现，成熟TLS富含生发中心B细胞（GC B）、滤泡辅助T细胞（Tfh）和组织驻留记忆CD8+ T细胞（TRM），并通过CXCL13-CXCR5轴促进免疫协同。新辅助治疗可诱导TLS成熟，为HNSCC免疫治疗分层提供新靶点。

　　

独特免疫亚型的发现

通过对TCGA-HNSC队列的转录组聚类分析，研究者将500例HNSCC样本分为4种免疫亚型。其中C4亚型以淋巴细胞浸润（LIexpression_score）为特征，富含B细胞和T细胞，且与最高TLS转录评分（9基因标志）和病理切片中的TLS-HE评分显著相关。值得注意的是，C4亚型患者总体生存期（OS）和无病生存期（DFS）更优，且82%的HPV阳性病例集中于此。TIDE算法进一步显示，C4亚型具有最低的免疫逃逸评分，提示其对免疫检查点阻断（ICB）治疗更敏感。

成熟TLS的临床关联

在150例初治HNSCC样本中，HPV阳性肿瘤的成熟TLS密度显著高于HPV阴性组（p=0.005），且CD20⁺ B细胞、CD4⁺和CD8⁺ T细胞浸润更丰富。24例接受新辅助抗PD-1联合化疗的患者中，病理完全缓解（pCR）或主要病理缓解（MPR）组的成熟TLS数量是对照组的2.3倍（p=0.020）。多光谱免疫组化证实，成熟TLS呈现生发中心样结构，中心为BCL6⁺CD20⁺ GC B细胞，外围环绕CD21⁺滤泡树突细胞（FDC）和PD-1⁺ Tfh细胞。

单细胞层面的TLS解析

整合8个scRNA-seq数据集（共338,451个CD45⁺细胞）发现，HPV阳性组和治疗响应者的TLS中，GC B细胞、Tfh和CD103⁺ TRM比例显著升高。空间转录组显示，这些细胞在TLS区域共定位，并通过LTα-TNFR2和CXCL13-CXCR5轴密切互作。值得注意的是，TRM高表达CXCL13，体外实验证实CD103⁺CD8⁺ T细胞经PMA刺激后CXCL13分泌量增加3.5倍（p=0.026），提示其可能驱动TLS形成。

未成熟TLS的组成特征

FCRL4⁺ B细胞和滤泡外周辅助T细胞（Tph）在未成熟TLS中占主导。这类Tph细胞（CXCL13^hiCXCR5^lo）与GC B细胞的互作评分最高，可能通过分泌CXCL13招募B细胞启动TLS形成。TGF-β处理可诱导CD103⁺ TRM和FCRL4⁺ B细胞分化（p<0.001），暗示其在早期TLS发育中的作用。

治疗诱导的TLS重塑

抗PD-1治疗后样本中，成熟TLS相关细胞（GC B、Tfh、TRM）比例增加，而Tph减少。尽管MPR组治疗前后TLS密度无显著变化（p=0.763），但非MPR组治疗后TLS数量上升42%（p=0.049）。一例典型病例在2周期治疗后，切除标本中出现4个新生成熟TLS，提示治疗可能通过释放肿瘤抗原促进免疫微环境重塑。

这项研究系统阐明了TLS成熟度与HPV状态和治疗响应的关联，为HNSCC免疫治疗分层提供了GC B细胞、Tfh和TRM等关键靶点，并揭示了CXCL13在TLS形成中的枢纽作用。未来或可通过诱导TLS成熟改善"免疫冷肿瘤"的治疗响应。