腹膜癌病模型中的长效抗肿瘤疗法：重组artLCMV载体的突破性研究

本研究通过腹腔注射(i.p.)重组artLCMV载体，在腹膜癌(PC)临床前模型中实现持续40天以上的长效转基因表达，展现显著抗肿瘤效应。载体编码肿瘤相关抗原(gp70/FRα)及免疫刺激分子(IL12/4-1BBL)，证实：①i.p.给药使病毒在腹膜腔特异性富集，表达强度较静脉注射(i.v.)提升100倍；②在MC38结肠癌模型中，gp70与IL12联用可协同激活CD8+T细胞，生存期显著延长(p<0.001)；③ID8-VEGF卵巢癌模型中，单用FRα抗原即达最佳疗效，IL12未能增效且引发体重下降。研究为精准化肿瘤免疫治疗提供新策略。

　　

持续体内表达与载体分布特征

通过携带NanoLuc报告基因的artLCMV载体评估病毒动力学，腹腔注射(i.p.)给药在腹膜腔实现超40天的持续高表达。在ID8-VEGF卵巢癌模型中，i.p.组全身生物发光强度较静脉注射(i.v.)或瘤内注射(i.t.)增强100倍。解剖学分布显示，病毒主要富集于腹膜相关组织（网膜与肠系膜），证实i.p.给药对腹膜癌病(PC)的靶向优势。

MC38结肠癌模型：IL12的关键协同作用

在MC38腹腔移植模型中，artLCMV.gp70单药治疗可延长生存期，但联用IL12后产生显著协同效应：

• 生存分析：gp70.IL12组中位生存期较gp70单药组提升2.3倍(p<0.001)，而gp70.4-1BBL未显增效

• 免疫激活机制：

  • ELISpot检测显示gp70.IL12组脾细胞经p15E_604–611肽刺激后，IFNγ分泌细胞增加4.8倍

  • 流式细胞术揭示网膜组织中CD8⁺CD25^-效应T细胞扩增2.1倍，CD4⁺Ki67⁺增殖T细胞增加67%

  • 免疫抑制性CD11b⁺髓系细胞减少42%

• 长期免疫记忆：生存小鼠140天后复种MC38肿瘤细胞，100%产生免疫排斥

ID8-VEGF卵巢癌模型：抗原单用已足够

在ID8-VEGF卵巢癌模型中呈现差异化响应：

• 生存获益：gp70或FRα单药均显著延长生存期(p<0.01)，但IL12或4-1BBL联用未进一步增效

• 毒性警示：gp70.IL12组早期出现体重下降(最大降幅12%)，提示IL12的剂量窗狭窄

• FRα靶向优势：

  • i.p.注射artLCMV.FRα较i.v.给药生存率提升300%

  • 特异性激活针对FRα的T细胞反应：CD8⁺效应T细胞增加1.9倍，调节性T细胞(Treg)减少35%

免疫调节机制深度解析

通过多维度免疫 profiling 揭示作用机制：

1. 抗原特异性应答：FRα载体刺激后，脾细胞对ID8-VEGF肿瘤裂解物的IFNγ分泌提升5.2倍

2. 肿瘤微环境重塑：

   • tSNE分析显示治疗组CD4⁺效应T细胞集群扩增

   • 增殖性CD19⁺Ki67⁺B细胞增加58%

3. 免疫检查点关联：FRα治疗组PD-1⁺CD8⁺T细胞比例下降，提示潜在联用价值

转化医学意义与临床前景

本研究确立artLCMV载体作为腹膜癌病免疫治疗新平台：

• 给药途径革新：i.p.注射实现腹膜腔特异性长效表达，规避全身毒性

• 精准免疫调控：IL12在MC38结肠癌中增效，但在ID8-VEGF卵巢癌中受限于肿瘤微环境(TME)异质性

• 临床转化基础：

  • 载体已完成GLP毒理研究，HPV16⁺癌临床试验(NCT04180215等)显示良好安全性

  • FRα靶向策略为卵巢癌提供新选择，避免IL12相关毒性风险

研究指明未来方向：需结合肿瘤分子分型优化抗原/佐剂组合，并探索与免疫检查点抑制剂(ICI)的联用策略。