时间分辨荧光免疫层析试纸条：猪伪狂犬病病毒gB抗体的现场快速检测新工具

为解决猪伪狂犬病（PR）疫苗免疫效果现场评估难题，河南省农业科学院研究团队开发了一种基于时间分辨荧光微球（TRFM）的免疫层析试纸条（TRFIC）。该技术可在10-15分钟内特异性检测PRV gB抗体，阳性符合率达96.8%，阴性符合率94.2%，且与CSFV、PEDV等病原抗体无交叉反应，为规模化猪场PRV免疫监测提供了高敏、便携的解决方案。

　　

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背景：养猪业的"伪狂犬"噩梦

伪狂犬病病毒（PRV）是严重危害全球养猪业的α-疱疹病毒，可致母猪繁殖障碍、仔猪脑炎死亡及育肥猪呼吸道疾病，造成巨额经济损失。更值得警惕的是，近年研究发现PRV可突破种属屏障感染人类，导致脑炎和视网膜炎。疫苗接种是防控核心手段，但传统检测方法——酶联免疫吸附试验（ELISA）需专业设备且耗时≥2小时，难以满足猪场现场快速评估免疫效果的需求。

破局者：河南省农业科学院的创新突破

河南省农业科学院动物免疫学重点实验室团队在《BMC Veterinary Research》发表研究，成功开发出一种基于时间分辨荧光微球（TRFM）的免疫层析试纸条（TRFIC），可在5分钟内实现PRV gB抗体的高精度现场检测。该技术不仅具备胶体金试纸条的便捷性，更通过稀土铕（Eu）螯合物的独特光学特性（长荧光寿命、大斯托克斯位移），彻底克服了传统荧光试纸条背景干扰强、灵敏度低的缺陷。

核心技术方法

研究人员通过昆虫细胞表达系统（sf21）制备高纯度PRV gB重组蛋白，经Western Blot验证其抗原性；利用碳二亚胺（EDC）介导的共价偶联将gB蛋白锚定于200 nm羧基化TRFM表面；在试纸条中采用间接法设计：以葡萄球菌蛋白A（SPA）为T线捕获剂，抗gB单抗为C线质控点，建立双信号判读体系。临床验证使用147份猪血清样本，以IDEXX商业ELISA试剂盒为金标准进行比对。

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研究结果：精准与速度的平衡艺术

1. 抗原制备与表征

gB蛋白在昆虫细胞中成功表达（图2），SDS-PAGE显示其可被蛋白酶水解为gB_a、gB_b、gB_c三个亚基，Western Blot证实gB_a和gB_c携带His标签。这种接近天然构象的重组蛋白为高特异性检测奠定基础。

2. 检测限低至1:102,400

通过梯度稀释阳性血清（1:200至1:204,800），确定TRFIC试纸条肉眼判读限为1:102,400（图4A），荧光分析仪定量限达1:204,800（图4B），较量子点试纸条（QDs-FIC）灵敏度提升4倍。

3. 零交叉反应凸显特异性

在PRRSV、CSFV、PEDV、FMDV阳性血清测试中，T线均无荧光信号（图5），证明该试纸条仅靶向PRV gB抗体，杜绝假阳性风险。

4. 临床符合率超95%

147份临床样本检测显示（表1），TRFIC与ELISA的总符合率达95.9%（141/147），显著优于QDs-FIC试纸条（92.6%）。其阳性/阴性符合率分别为96.8%（92/95）和94.2%（49/52），满足现场筛查要求。

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结论：改写PRV免疫监测格局

本研究首次将时间分辨荧光技术应用于PRV gB抗体快检领域，其核心突破在于：

1. 双模态判读：支持紫外灯肉眼定性（图1D-i）和仪器定量分析（图1D-ii），满足不同场景需求；

2. 5分钟极速响应：较ELISA提速24倍，实现免疫效果即时评估；

3. 产业化潜力：试纸条可在4°C稳定存储，单个成本仅需微量血清（1μL）。

该技术已获河南省科技攻关项目（252102110264）和国家重点研发计划（2024YFE0199100）支持，未来可通过物联网荧光分析仪实现猪场抗体大数据管理。正如通讯作者刘蕴超研究员强调："TRFIC试纸条犹如养猪业的'免疫听诊器'，将助推PRV净化从被动治疗转向主动防御，为全球重大动物疫病智慧防控提供中国方案。"